基于聚甲基丙烯酸聚合物刷的多肽功能化构建高灵敏蛋白酶检测芯片

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通过表面引发原子转移自由基聚合(SI-ATRP)在Si O2纳米粒子表面接枝聚甲基丙烯酸(PMAA)聚合物刷并对其进行多肽功能化修饰。当聚合物刷上的多肽底物被蛋白酶水解,释放出荧光标记的多肽残基(GGK-FITC),经过离心、超滤分离后用荧光显微镜检测反应液中的荧光强度,从而定量表征溶液中蛋白酶的检测下限(LOD)及其酶促反应动力学参数(Km,vmax,kcat等)。之后在玻璃基板表面构建聚丙烯酰胺凝胶微阵列和聚乙二醇(PEG)微柱环,当PMAA聚合物刷上的多肽底物被蛋白酶水解,释放出的多肽残基(GGK-FITC)可以进入聚丙烯酰胺凝胶微阵列的高分子网孔,从而实现多肽残基的分离与蛋白酶检测(LOD=157 pM)。通过在凝胶微阵列高分子骨架中引入环糊精(CD),同时在多肽残基中引入金刚烷(Ad)基团,利用Ad-CD超分子自组装作用可以进一步提高蛋白酶检测的灵敏度(LOD=13.2 pM)。
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