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目的：探讨整合素β1在表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)获得性耐药中的作用及其参与耐药的相关信号转导通路.
方法：采用MNNG诱变吉非替尼敏感的人肺腺癌细胞株PC9并吉非替尼筛选获得耐药株PC-9/G.MTT比色法检测吉非替尼和/或LY294002、PD98059对细胞增殖抑制率的影响.细胞粘附实验观察细胞粘附状况,免疫组化法测定上皮-间质转化(EMT)标志蛋白及CogagenⅣ的表达差异.流式细胞术进行细胞周期分析及凋亡检测.Western Blot检测EGFR、磷酸化EGFR;Akt、磷酸化Akt的表达.巢式-PCR扩增产物测序检测EGFR基因突变.基因表达芯片检测PC9和PC9/G的基因表达差异.RNAi转染肿瘤细胞株,抑制整合素β1的表达.Western Blot检测转染前后整合素β1的表达水平及MTT检测转染细胞对吉非替尼敏感性,TUNEL法检测转染细胞凋亡.
结果：与PC-9相比,吉非替尼耐药细胞株PC9/G对吉非替尼的耐药倍数约为140-241倍.两株细胞的倍增时间及细胞周期分布无显著差异.两株细胞的粘附性相似,细胞组化结果提示PC9细胞为间质型、PC9/G为上皮型.两株细胞的EGFR基因序列相同,磷酸化EGFR水平相似.PC9/G细胞存在整合素β1高表达,shRNA干涉整合素β1能够显著抑制PC9/G细胞的生长、促进调亡.ERK抑制剂PD98059不能恢复PC9/G细胞对吉非替尼的敏感性.PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt的磷酸化的抑制作用显著弱于PC-9细胞.PI3-K抑制剂LY294002能恢复PC9/G细胞对吉非替尼的敏感性,RNAi抑制整合素表达后Akt的磷酸化水平显著降低.
结论：研究结果表明活化的整合素β1通过PI3-K途径激活下游信号分子是一种重要的EGFR TKI耐药机制,整合素β1有望作为一个新的治疗靶点用于治疗那些EGFR TKI治疗不敏感的患者.