[目的]利用3D打印技术制备一种细胞支架用于肺癌细胞三维培养，并对其生物兼容性、三维培养的可行性进行研究，探讨三维培养与二维培养的差异性。[方法]利用3D打印技术和冷冻干燥技术制备一种细胞支架，利用物理测量、光镜、电镜、MTT法及Western Blot研究支架的孔径大小、孔隙率、吸水率、细胞黏附率以及细胞生长形态、生长曲线、蛋白表达，明确其生物兼容性和三维培养可行性，并与二维培养的差异。[结果]成功制备了一种多空隙的琼脂一海藻酸钠材料支架，孔径大小适中，孔隙率高，吸水性强，细胞接种率高，细胞种植后能形成细胞球，并能持续生长，细胞形态、增殖能力、蛋白表达与二维培养细胞差异明显。[结论] 3D打印技术和冷冻干燥技术能制备琼脂一海藻酸钠支架，生物兼容性好，适合用于细胞三维培养。