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本试验通过对酶制剂产品的状况和国内外研究进展,选择了六种蛋白酶酶制剂用于酶解处理血球粉,探讨蛋白酶酶解处理对血球粉蛋白结构的影响.利用单因素分析和响应面旋转中心组合设计,以水解度为研究对象,得到了6种蛋白酶酶解血球粉的最佳工艺条件,分别为(1)中性蛋白酶:pH值=6.50、温度为45℃、E/S=0.1129、时间为12h,得到的水解度为35.060 2(理论值是35.130 4%);(2)酸性蛋白酶Ⅰ: pH值=3.05、温度为50.8℃、E/S=0.545 6、时间为16h,得到的水解度为69.94(理论值为70.08%); (3)酸性蛋白酶Ⅱ:pH值=4.00、温度为50℃、E/S=0.182 0、时间为12h,得到的水解度为45.39(理论值为45.42%);(4)胃蛋白酶:pH值=1.00、温度为30℃、E/S=0.057 9、时间为16h,得到的水解度为26.69(理论值为26.77%);(5)碱性蛋白酶:pH值=10.00、温度为50℃、E/S=0.026 6、时间为12h,得到的水解度为86.22(理论值为86.28%);(6)胰蛋白酶:pH值=8.98、温度为55℃、E/S=0.1835、时间为6h,得到的水解度为61.39(理论值为61.41%).经过SDS-PAGE电泳发现,未处理的血球蛋白主要在条带分布主要有10~15kDa、25 ~ 40kDa和70kDa附近的3条带,而经过蛋白酶酶解处理后,大部分的蛋白含量都在10kDa以下.蛋白酶酶解处理的血球粉的色度都得到改善,且碱性蛋白酶脱色效果最好.以各自的最佳工艺条件制备得到的六种酶解血球粉产品,利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用法(GPC-MALS)法来测定蛋白的绝对分子量,结果发现:随着蛋白酶水解度的增大,蛋白分子质量逐渐变小,中性蛋白酶、酸性蛋白酶Ⅰ、酸性蛋白酶Ⅱ、胃蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶在0 ~ 5kDa分子质量所占的洗脱体积为15.53%、64.76%、46.23%、10.82%、98.10%和83.22%.以上研究结果表明:血球粉经蛋白酶酶解处理后,其大分子蛋白被酶解成肽类物质,同时酶解处理也起到了很好的脱色效果,有利于血球粉在动物饲料中的利用.