基于DNA酶和无机酶级联信号放大策略的变异链球菌检测研究

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目的:基于G-四链体-氯化血红素-DNA酶结构与无机Fe3O4粒子的双重酶活性构造的一种新型纳米传感器,用于检测变异链球菌的方法研究。方法:将核酸适配体与互补链一同通过链霉亲和素-生物素系统结合于Fe3O4表面,在氯化血红素与K+的作用下,形成具有双重酶活性的G-四链体-Fe3O4纳米传感器,起到信号的级联放大作用。变异链球菌可与互补链竞争核酸适配体,破坏G-四链体的酶活性中心,同时阻碍Fe3O4表面与氧化底物的接触,双重酶活性抑制作用使生成的蓝色产物随细菌量的增加而减少,转化为可供检测的光密度(Optical density,OD值)信号。结果:反应体系的OD值与变链菌的浓度呈良好的负相关性,可从最大的1.956降至0.215,信噪比可达9倍,在检测人工唾液模拟的真样本中具备优良的灵敏度和特异性,相比于培养法等传统的细菌检测方法具有简单、快捷、低成本等优势。结论:本实验通过G-四链体-氯化血红素-DNA酶结构与无机酶Fe3O4构造的纳米传感器可快速灵敏地检测变异链球菌,为临床及实验室快速检测细菌提供了新的研究方向。
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