【摘 要】
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[目的]探讨无定型纳米二氧化硅颗粒诱导人正常肝细胞(HL-7702)细胞凋亡,并阐明其作用机制.[材料和方法]选用粒径约为60 nm的无定型纳米二氧化硅颗粒,以体外培养的人正常干细胞(HL-7702)为模型,分为对照组和纳米二氧化硅颗粒暴露组(暴露浓度分别为25、50、100和200 μg/mL),检测纳米二氧化硅颗粒表征.采用CCK-8试剂盒测定细胞活力；采用HE染色法观察细胞形态变化；吉姆萨染
【机 构】
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山东省职业卫生与职业病防治研究院 山东省医学科学院,济南250062 呼吸内科济南市儿童医院,济南
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]探讨无定型纳米二氧化硅颗粒诱导人正常肝细胞(HL-7702)细胞凋亡,并阐明其作用机制.[材料和方法]选用粒径约为60 nm的无定型纳米二氧化硅颗粒,以体外培养的人正常干细胞(HL-7702)为模型,分为对照组和纳米二氧化硅颗粒暴露组(暴露浓度分别为25、50、100和200 μg/mL),检测纳米二氧化硅颗粒表征.采用CCK-8试剂盒测定细胞活力；采用HE染色法观察细胞形态变化；吉姆萨染色法及流式细胞术观察纳米二氧化硅颗粒对细胞凋亡的影响；经罗丹明-123(Rhodamin-123,Rh-123)染色,通过流式细胞术检测纳米二氧化硅颗粒对线粒体跨膜电位的影响；采用Western Blot方法和免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt C和Caspase-3在各组中的表达.[结果]CCK-8检测结果显示,与对照组比较,纳米二氧化硅颗粒暴露组细胞活力降低,呈现明显的剂量依赖效应；当作用时间为12h时,仅200 μg/mL纳米二氧化硅颗粒暴露组细胞活力显著降低(p＜0.05)；当作用时间延长至24 h,50～200 μg/mL纳米二氧化硅颗粒暴露组细胞活力明显降低(p＜0.05)；同一浓度作用下,随着作用时间的延长,细胞活力也呈现下降趋势,呈时间效应关系.暴露纳米二氧化硅颗粒后,HL-7702细胞形态发生改变；纳米二氧化硅颗粒可诱导HL-7702细胞凋亡,与对照组比较,除25 μg/mL组外,其余纳米二氧化硅颗粒暴露组HL-7702细胞凋亡显著(p＜0.05)；纳米二氧化硅颗粒可引起线粒体跨膜电位下降,与对照组比较,有显著性差异(p＜0.05)；纳米二氧化硅颗粒可诱导Bax和Bcl-2表达增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；而且还观察到Bcl-2/Bax的比值有下降趋势.纳米二氧化硅颗粒暴露组中的Cyt C及Caspase-3蛋白的表达显著高于对照组(p＜0.05).[结论]无定型纳米二氧化硅颗粒具有降低细胞活力,引起HL-7702细胞形态改变,诱导细胞凋亡,引起细胞膜电位下降,释放Cyt C,调控暴露组细胞中Bax、Bcl-2、Cyt C和Caspase-3蛋白的表达增加；纳米二氧化硅颗粒通过线粒体途径诱导HL-7702细胞凋亡.
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