获得性免疫缺陷综合症(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),其病原体属于逆转录病毒的人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)。HW-1有两个调节基因tat和rev,分别编码反式激活蛋白(Trans-activator of transcription,Tat)和病毒颗粒蛋白表达调节因子(Regulator ofvirion protein expression,Rev)。Tat是HIV病毒复制所必需的,可调节病毒基因组的mRNA转录的延伸,并与细胞的凋亡有关；Rev通过与茎环结构的Rev应答原件(Rev responsive element,RRE)结合,介导部分剪切或未剪切的转录产物出核,进而促进病毒结构蛋白的合成。Tat和Rev在HW-1基因表达的调控和生命周期中发挥重要作用,使其成为抗HIV治疗的新靶点。　　 本课题选择HIV-1调节基因作为靶点,采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术干扰其表达。实验中构建了tat/rev的表达载体pDsRed-Tat/pDsRed-Rev,以及多个针对tat,rev基因不同位点的siRNAs表达载体和microRNAs表达载体。将目的基因表达载体pDsRed-Tat/pDsRed-Rev与siRNA/microRNA表达载体共转染到293 FT细胞中,采用荧光显微镜技术和流式检测技术初步筛选到4条siRNAs、2条microRNAs对tat基因表达具有很好的抑制作用,2条rev特异性的siRNAs对rev基因的表达有很好的抑制作用,抑制效率均可达60％左右。在RNA水平采用Real-time PCR技术对mRNA进行相对定量,结果显示tat基因特异性LX4号的siRNA和1473号的miRNA处理组的mRNA拷贝数降至对照组的0.0333和0.0742倍,对tat mRNA有明显的降解作用,rev基因特异性LX8和LX11组rev mRNA拷贝数降低为对照的0.2270和0.2011倍,也有较好的抑制作用。利用HIV-1假病毒实验,检测出针对tat的4条siRNAs对HIV-1假病毒的感染力有较好的抑制作用,其中LX4号抑制作用最显著,抑制效率可达到90％左右。针对rev基因的LX11和LX8号siRNAs,对HIV-1假病毒的p24生成有一定的抑制作用,抑制效率分别为34.57％和34.20％。