【摘 要】
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目的:筛选并鉴定靶向调控膀胱癌RhoGDI2基因的miRNA。方法:首先通过The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库下载膀胱癌的基因表达和miRNA测序数据以及甲基化数据,在线网站预测和RhoGDI2具有结合位点的miRNA。然后使用TCGA数据库的膀胱癌数据分别进行miRNA-m RNA和甲基化-m RNA的关联分析,找出RhoGDI2可能的调控方式;构建带有RhoGDI
【基金项目】
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项目名称:靶向调控膀胱癌转移抑制基RhoGDI2的miRNA鉴定及功能分析,项目合同编号:No.GXBMR201605,项目来源:广西高校生物分子医学研究重点实验室开放课题,项目起止时间:2018.03-2020.03; 项目名称:携带RhoGDI2基因的新型溶瘤痘苗病毒靶向膀胱癌治疗研究,项目合同编号:No.GXSWBX201501,项目来源:广西生物靶向诊治研究重点实验室开放课题,项目起止时间
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目的:筛选并鉴定靶向调控膀胱癌RhoGDI2基因的miRNA。方法:首先通过The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库下载膀胱癌的基因表达和miRNA测序数据以及甲基化数据,在线网站预测和RhoGDI2具有结合位点的miRNA。然后使用TCGA数据库的膀胱癌数据分别进行miRNA-m RNA和甲基化-m RNA的关联分析,找出RhoGDI2可能的调控方式;构建带有RhoGDI2序列的质粒载体并和预选miRNA的模拟物共转染入293T细胞中进行双荧光素酶实验,检测他们的分子结构上的结合能力;western blot检测4种不同侵袭性的膀胱癌细胞中的RhoGDI2和RAC1的蛋白表达,以及对比不同RhoGDI2表达下的膀胱癌细胞生物学行为。结果:通过初步的生物信息学分析,我们认为miRNA的转录后调控更可能是RhoGDI2的潜在调控方式,并初步筛选出了hsa-miR-34c-5p、hsamiR-375作为预选的miRNA;在双荧光素酶实验中,RhoGDI2的3’UTR质粒和hsa-miR-375 mimic共转染后与其他组相比萤火虫荧光活性明显下降（P<0.05）,两者之间存在结合位点。hsa-miR-34c-5p与RhoGDI2之间未检测到存在结合位点;我们发现在4种膀胱癌细胞中,RhoGDI2和RAC1的蛋白表达存在显著的正相关;RT4和SW780的RhoGDI2表达明显高于T24和UMUC3。同时,RT4和SW780在细胞增殖和侵袭能力上都显著更弱于T24和UMUC3。结论:RhoGDI2表达较高的患者会拥有更好的预后。相比于甲基化调控,膀胱癌中RhoGDI2的表达下降更可能是miRNA的转录后调控造成的。双荧光素酶实验证实了hsa-miR-375与RhoGDI2之间具有分子结构上的结合能力。RhoGDI2和RAC1拥有较强的正相关性,并且高表达的RhoGDI2的膀胱癌细胞显著具有更低的细胞增殖和侵袭能力。
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