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目的:本研究第一部分探索性筛选可能与暴发性乙型病毒性肝炎(暴发性乙型肝炎,FHB)发病相关的宿主遗传因素,并通过构建小鼠模型进行动物实验研究筛选出的相关基因在FHB发病机制中的可能作用。研究的第二部分通过对Ⅰa型糖原累积症(GSD-Ⅰa)和肝豆状核变性(WD)致病基因进行突变分析对相应疾病提供确诊依据并寻找新的致病突变。方法:第一部分研究对10个不相关的FHB患者基因组DNA全外显子组进行高通量测序。通过生物信息学分析策略筛选可能影响蛋白功能的基因突变。在282名包括无症状自限性感染(ASL)、急性乙型肝炎(AHB)及慢性乙型肝炎(CHB)患者组成的对照组中用直接DNA测序验证候选FHB相关基因变异。分别转染野生型和突变型TLR2表达质粒到HEK293细胞中研究突变蛋白的功能变化。通过尾静脉高压注射HBV质粒到Tlr2基因缺陷小鼠和C57BL/6小鼠构建HBV转染小鼠模型。采集不同时间点的小鼠血清标本检测血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)及HBV DNA指标。第二部分研究对GSD-Ⅰa致病基因G6PC和WD致病基因ATP7B的基因进行直接DNA测序和突变分析。通过对100名健康人的基因组DNA直接测序验证发现的新突变。应用Rsa I限制性内切酶消化实验验证在GSD-Ⅰa患者中新发现的突变。结果:第一部分研究中筛选出位于11个基因上的12个改变蛋白功能的新发基因变异,分别是AOAH、APPL1、C5、CYLD、IL1RL1、ITSN2、NPC1、TLR2、TNFRSF17、UNG及XRCC5基因。有至少6个基因直接或间接参与NF-κB细胞信号通路。位于TLR2基因上的同一突变F679I存在于2个不相关FHB患者中,体外细胞实验证实此突变造成蛋白功能缺失,进一步的小鼠实验发现转染HBV质粒后Tlr2缺陷小鼠较C57BL/6背景鼠有更高的血清ALT水平。第二部分研究在1名GSD-Ⅰa患者中检测出1个新发终止密码框移突变p.*358Yext*43,在WD患者中检测出4个新发突变I116T、A982T、G1030D、W1353*,11名WD患者也依据基因突变分析明确了诊断。结论:本研究是国际上首次应用全外显子组测序筛选出FHB发病相关宿主遗传变异。筛选出的变异基因超过一半与NF-κB细胞信号通路有联系,提示此信号通路在FHB致病机制中发挥重要作用。TLR2的体外细胞实验及小鼠体内实验也强有力地提示TLR2可能与病毒相互作用并参与到机体早期抗HBV感染防御过程中。通过基因突变分析不仅可以为遗传性肝病患者明确诊断,检测到的新发突变也增加了相应致病基因的突变谱。