研究背景：结肠癌为临床常见恶性肿瘤之一，2010年在美国位列肿瘤死亡率第三位，在我国的死亡率则排在第四～六位，在对近些年我国结肠癌的发病率进行统计发现，总体上呈上升趋势，虽然结肠癌患者接受根治性手术治疗及辅助性放化疗的治疗率高达70%～80%，但仍有大量患者死于肿瘤复发或转移。导致肿瘤复发或转移的原因有很多，其中重要之一就是肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药。目前针对肿瘤耐药的研究已成为肿瘤治疗研究领域的一大热点。Lin28是一个高度保守的小RNA结合蛋白，其亚型Lin28B在结肠癌肿瘤组织中表达明显升高，而且Lin28B能够促进结肠癌肿瘤细胞向远处转移。同时Lin28还是肿瘤干细胞的表面分子标记物，能够诱导多能干细胞形成并维持肿瘤干细胞特性。研究发现在乳腺癌等恶性肿瘤中Lin28能够抑制Let-7的成熟，高表达Lin28的肿瘤组织中相应的Let-7水平下降。而在肺癌中，Lin28能够诱导肺癌肿瘤细胞对放疗耐受。小分子RNA（microRNA）Let-7能够促进细胞分化，与Lin28B存在调控关系，在结肠癌组织中低水平表达。在肝癌的研究中发现，Lin28B-Let-7与肝癌干细胞密切相关，干细胞在诱导肿瘤耐药方面起着举足轻重的作用。而在结肠癌中对于Lin28B-Let-7的调控关系以及其对化疗药物敏感性的影响尚不明确，因此我们拟通过以下的实验设计，明确Lin28B-Let-7在结肠癌中的调控关系，并阐明其对结肠癌细胞化疗敏感性的影响，从而有助于对逆转结肠癌耐药性关键靶点的研究。目的：1、在8种人结肠癌细胞系中检测Lin28B的表达，并在人结肠癌组织中的检测其表达情况，进而对其定位表达进行观察；2、在过表达Lin28B的结肠癌细胞中证实Lin28B-Let-7调控环路的存在；3、过表达Lin28B/Let-7，观察其对化疗药物5-FU敏感性的变化。材料与方法：1、对8种人结肠癌细胞系进行PCR检测，观察Lin28B表达情况；Real-time PCR，Western Blot及免疫组化技术对解放军总医院海南分院21例结肠癌和19例正常结肠组织进行检测，观察Lin28B表达情况；2、在人结肠癌细胞系中分别采用免疫荧光法、核浆蛋白分离后行Western Blot和表达GFP慢病毒载体感染的方法检测Lin28B的表达定位。在人结肠癌组织中进行免疫组化染色以进一步确认定位观察；3、在人结肠癌细胞系中，分别过表达Lin28B后观察Let-7的表达情况；反之，过表达Let-7观察Lin28B是否受到抑制；最后，检测过表达Let-7或Lin28B对化疗药物5-FU敏感性的影响。结果：在结肠癌细胞系HCT116、SW620、SW1116、SW480、LOVO、Lim1215、LS174T和DLD1以及结肠癌组织中均发现Lin28B有着广泛的表达，且在结肠癌组织中的表达明显高于正常的结肠组织。继而，Lin28B的定位表达的实验结果观察到其在细胞核和细胞浆中均有表达，且在细胞浆中呈现高表达。随后，通过Real-time PCR和Western Blot的结果验证了Lin28B-Let-7调控环路的存在。最后，药敏试验结果显示过表达Let-7的结肠癌细胞对5-FU化疗药物的敏感性增加，而过表达Lin28B的结肠癌细胞对5-FU化疗药物的敏感性降低。结论：1、在人结肠癌细胞系和结肠癌组织中，Lin28B广泛的表达，且在肿瘤组织中的表达明显高于正常的结肠组织；2、Lin28B在结肠癌细胞核中有表达，同样在细胞浆中也有表达，且在细胞浆中的表达远高于在细胞核中的表达；3、Lin28B和Let-7调控环路存在如下关系：Let-7升高会抑制Lin28B的表达，同样，Lin28B过表达可以抑制let-7的成熟；4、增加Let-7在结肠癌细胞中的表达能够提高结肠癌细胞对化疗药物敏感性；反之，增加Lin28B在结肠癌细胞中的表达能够降低结肠癌细胞对于化疗药物的敏感性。