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目的：通过比较菥蓂药材、花红片及阴性对照品，找出并分离菥蓂药材在花红片中的独有化合物，测得独有化合物在菥蓂药材和花红片中的含量，并以该化合物作对照，建立不同产地菥蓂药材的HPLC指纹图谱，为菥蓂药材的鉴别及质量控制提供依据。 方法：采用HPLC图谱对比法，找出菥蓂药材在花红片中的特征峰，并利用高效半制备液相色谱法分离此特征峰，用13C谱法(13C-NMR)、1H谱法(1H-NMR)、质谱法(Ms)、紫外光谱法(UV)确定该化合物的结构；采用HPLC法测得该独有成分在菥蓂药材和花红片中的含量；采用HPLC梯度洗脱，建立菥蓂药材的指纹图谱，同时运用国家药典委员会颁发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A版》软件对不同产地的11批菥蓂药材色谱图的相关参数进行匹配与相似度评价。 结果：分离得到独有化合物异牡荆苷、荭草苷，其纯度>98％（面积归一化法）；HPLC法测定荭草苷含量：检测波长为340 nm，荭草苷的保留时间约为7 min。指纹图谱：检测波长为273 nm，梯度洗脱，以异牡荆苷的峰为参照峰，在60min内记录11批药材的指纹图谱，各批药材共建立了17个共有峰。 结论：高效半制备液相色谱法分离制备异牡荆苷和荭草苷方法简单、高效；通过测定不同批次的菥蓂药材和花红片中荭草苷的含量，确定荭草苷在不同批次的药材和花红片的平均含量，所建立的HPLC法测定荭草苷含量灵敏度高，专属性、重现性好，能准确快速地对花红片及菥蓂药材中荭草苷的含量进行测定；指纹图谱分析方法稳定性、精密度、重现性较好，不同产地菥蓂药材指纹图谱相似度良好，所建立的指纹图谱有较强的针对性，用于菥蓂药材的研究开发和质量评价切实可行。