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肝细胞肝癌(HCC)是全球癌症死亡的主要肿瘤之一,其特点为恶性度高、预后较差,死亡率高。近年来HCC的发病率不断增加,每年新增50～100万患者。HCC常用治疗方法包括肝脏外科手术、放射治疗、化学治疗、肝脏移植等多种治疗手段,其中以外科手术切除为首选,但大多数患者确诊时已发展至癌症晚期,且患者体质差,仅20%左右的患者适合肝切除手术。化学治疗仍是目前治疗HCC患者主要治疗方法之一,但临床上常用的HCC化疗药物,毒副作用大,患者耐受性差,且肿瘤细胞对化疗药物易产生耐药性,致使临床治疗效果不够理想,因此,寻求安全有效的HCC化疗药物显得尤为重要。雷公藤红素(Cel)是从传统中药卫矛科植物雷公藤属及南蛇藤属植物中分离出的活性较高的五环三萜类物质。研究表明,Cel具有较好的抗炎、抗氧化等药理作用,被广泛应用于自身免疫性疾病、神经退行性疾病等疾病的治疗,并取得了较好的疗效。研究同时表明,Cel能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,抑制神经胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌等多种肿瘤的生长,具有明显的体内、体外抗肿瘤活性。但Cel对HCC是否具有抗肿瘤活性,目前尚未见相关文献报道,因此本文对Cel抗HCC的作用及其机制进行了研究。目的：1.考察Cel体内、外抗HCC作用；2.揭示Cel抗HCC的可能的作用机制方法：1采用二乙基亚硝胺(DEN)诱导SD大鼠HCC模型,分为正常对照组、模型对照组、Cel给药组(2、4、8mg·kg-1)和阳性对照组(消癌平,XAP,800mg·kg-1)组,共6组。大鼠每天9时左右灌胃给予DEN溶液,10mg·kg-1体重,每天1次,每周6天,正常组给予等量的生理盐水,共16周。造模第10周开始,给药组分别灌胃给予相应受试物。每天1次,连续10周,正常对照组及模型对照组给予等量的5%CMC-Na,实验第20周股动脉取血处死大鼠,取肝脏,称重,记录大鼠肝脏重量、肝脏表面肿瘤结节数及结节体积；HE染色观察各组大鼠肝脏组织病理学变化；紫外分光光度法检测各组大鼠血清中AST、ALT、ALP水平变化；ELISA法检测大鼠血清中AFP水平变化；Western-blot法检测大鼠肝脏中MDM2、P53、Bax、Bcl-2表达水平的变化。2MTT法检测不同浓度Cel (0.39、0.78、1.56、3.12、6.25、12.5μg·ml-1)对肝癌Bel-7402细胞的生长抑制作用；Hoechst33342荧光染色、流式细胞术、Tunnel染色等方法检测不同浓度Cel对Bel-7402细胞凋亡的影响；Western-blot法检测Cel对Bel-7402细胞中MDM2、P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cytochrome c, Cytc)、Fas和FasL蛋白表达的影响。结果：1.Cel对DEN诱导HCC大鼠的治疗作用1.1Cel对DEN诱导肝癌大鼠肝脏指数、肿瘤结节数及肿瘤体积的影响与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏指数明显升高、肝脏肿瘤结节数明显增多,结节体积显著增大。与模型组相比,Cel (4、8mg·kg-1)均能够显著降低HCC大鼠升高的肝脏指数；Cel (2、4、8mg·kg-1)能够明显减少肝表面结节数,显著减小肿瘤结节体积。1.2Cel对DEN诱导肝癌大鼠肝脏病理组织学的影响正常对照组大鼠肝小叶结构完整,肝细胞索排列整齐,细胞核清晰；模型对照组大鼠肝小叶结构紊乱,大量假小叶形成,炎性细胞浸润,HCC细胞低分化；Cel各剂量组显著减轻炎性细胞浸润,减少大鼠假小叶形成,癌细胞异型性低。1.3Cel对DEN诱导HCC大鼠血清AFP、AST、ALT、ALP水平的影响与正常对照组比较,模型组大鼠血清中AFP、ALT、AST、ALP水平明显升高。与模型组相比,Cel (4、8mg·kg-1)能显著降低DEN升高的大鼠血清ALT、 AST、ALP水平,同时Cel (2、4、8mg·kg-1)能明显降低血清中AFP含量。1.4Cel对DEN诱导HCC大鼠肝组织中MDM2、P53、Bax、Bcl-2表达的影响与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织中MDM2、Bcl-2表达显著升高,P53、Bax表达显著降低。与模型组相比,Cel (2、4、8mg·kg-1)均能显著降低肝组织中MDM2、Bcl-2表达,升高P53、Bax的表达。2Cel对肝癌Bel-7402细胞的作用2.1Cel对肝癌Bel-7402细胞生长的影响Cel (0.78～12.5μg·ml-1)各浓度组对肝癌Bel-7402细胞均有明显的生长抑制作用。Cel0.39μg·ml-1对肝癌Bel-7402细胞无明显生长抑制作用。2.2Cel对肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响Cel作用Bel-7402细胞24h后,细胞核染色质呈固缩状、圆珠状或斑块状,凋亡细胞数明显增加；流式细胞仪检测细胞凋亡率,Cel (0.78～3.12μg·ml-1)处理Bel-7402细胞24h后,其凋亡率明显增加,凋亡率分别为：18.6±3.7%、34.6±2.8%、40.3±1.7%。2.3Cel对肝癌Bel-7402细胞MDM2、P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、 Caspase-9、Cytc、Fas和FasL蛋白表达的影响。Cel (0.78～3.12μg·ml-1)作用Bel-7402细胞24h后,细胞中P53、Bax、Fas、 FasL、活化的Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达明显升高,MDM2和Bcl-2表达显著降低,且Cel促使Cyt c由线粒体膜释放进入胞浆。结论：Cel具有明显的抗HCC作用,其机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关。