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本文从青岛文昌鱼(Branchiostomabelcheri tsingtaunese)肠cDNA文库中,克隆了具有完整编码框的SAHH基因(AmphiSAHH),并对其结构、表达、进化及蛋白特性展开了研究。
青岛文昌鱼SAHH基因包括一个1305bp的最大开放阅读框,编码434个氨基酸,推测其分子量为47.8kDa。同源分析比对发现,文昌鱼SAHH蛋白与其它物种SAHH蛋白的相似性高达67.3%-82.1%。在所建的进化树中,文昌鱼SAHH蛋白位于脊椎动物分枝的基部,脊椎动物和无脊椎动物各自聚群,支持了文昌鱼是脊椎动物起源的观点,也进一步证明AmphiSAHH是脊椎动物和无脊椎动物SAHH蛋白的同源物。原位杂交分析表明,AmphiSAHH在文昌鱼原肠胚内胚层开始表达,在神经胚及幼虫时期信号也在肠部出现,推测SAHH基因对文昌鱼发育过程中肠的形成有重要的作用。AmphiSAHH基因组DNA序列分析发现其具有八个外显子和七个内含子,分析各物种SAHH基因组DNA序列发现,海鞘(九个外显子与八个内含子)与脊椎动物(十个外显子和九个内含子)似乎有更近的亲源性。本文还利用实时定量技术检测了Ado对文昌鱼SAHH基因表达的影响。
原核表达并纯化了文昌鱼His-SAHH重组蛋白,获得分子量约为48kDa的纯化蛋白。利用分光光度法和HPLC法检测重组蛋白的酶活及其与NAD<+>/NADH的结合系数。使用成品SAHH多克隆抗体进行Western杂交及免疫组化实验,结果表明,抗体能与我们的重组蛋白特异性杂交,SAHH蛋白主要分布在文昌鱼精巢、卵巢、肝盲囊及鳃裂。