论文部分内容阅读
第一部分益气补肾法治疗糖尿病视网膜病变的系统评价目的运用Meta分析对益气补肾方法治疗糖尿病视网膜病变的临床疗效进行系统评价。方法应用互联网进行文献检索,外文文献检索PubMed、Cochrane图书馆、Embase数据库,中文文献检索中国知网（CNKI）、维普和万方医学数据库。收集自建库至2022年1月30日所有的以益气补肾方法治疗糖尿病视网膜病变的随机对照临床试验文献（RCT）。由包含作者在内的两名评论员各自独立分析纳入文章,运用Revman5.4软件进行系统评价。结果纳入RCT研究总计13项,共有患者1227例。将临床疗效、视力、眼底检查评分、中医证候积分、黄斑中心凹厚度、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、不良事件发生率,均分别纳入Meta分析。1.益气补肾法组较对照组临床疗效明显提高:[OR=3.60,95%CI（2.72,4.77）,Z=8.93,P＜0.00001];2.益气补肾法组较对照组更能有效改善视力:[MD=0.19,95%CI（0.10,0.28）,P＜0.00001];3.益气补肾法组较对照组能有效降低眼底检查评分:[MD=-0.31,95%CI（-0.37,-0.25）,P＜0.00001];4.益气补肾法组较对照组能有效降低中医证候积分:[MD=-5.42,95%CI（-7.98,-2.85）,P＜0.00001];5.益气补肾法组较对照组能有效降低黄斑中心凹厚度:[MD=-20.18,95%CI（-30.79,-13.57）,P＜0.00001];6.益气补肾法组较对照组能有效降低VEGF水平:[MD=-34.84,95%CI（-41.12,-28.56）,P＜0.00001];7.益气补肾法组较对照组能有效降低TNF-α水平:[MD=-16.46,95%CI（-26.15,-6.76）,P＜0.001];8.益气补肾法组较对照组能有效降低不良事件的发生:[OR=0.45,95%CI（0.21,0.95,Z=2.10,P＜0.05）。结论以益气补肾方法治疗糖尿病视网膜病变的疗效显著,其临床疗效、视力均优于对照组,并能降低眼底检查评分、中医证候积分、黄斑中心凹厚度、VEGF水平、TNF-α水平,减少不良事件发生率,具有较高的临床价值。第二部分益气补肾方对糖尿病大鼠视网膜病变的作用与机制研究目的通过动物实验,研究益气补肾方对糖尿病大鼠视网膜病变的作用,并初步探究其可能的机制。方法选取60只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组（C组）、模型组（M）、益气补肾方低剂量组（L组）、益气补肾方高剂量组（H组）,每组15只。适应性喂养1周后,除对照组腹腔注射60mg柠檬酸钠溶液外,其余三组大鼠腹腔注射60mg柠檬酸钠溶液稀释的链脲佐菌素溶液造模。L组与H组分别灌胃200mg/kg/d和800mg/kg/d的益气补肾方悬浊液,C组与M组给予等体积超纯水灌胃。灌胃时长为8周,期间每周记录大鼠一般状态、体重、血糖。实验结束后取大鼠血清、眼球、视网膜组织进行研究。血清检测与糖尿病视网膜病变相关的危险因素总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血清胱抑素-C（Cys-C）、尿酸（UA）和肝肾功能相关的基础指标谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）;眼球行视网膜病理切片观察视网膜病理组织变化;qRT-PCR法检测视网膜组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、TNF-α和血红素氧合酶1（HO-1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）与VEGF、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）mRNA表达;Western Blot法检测视网膜组织GFAP、VEGF蛋白的表达。结果1.一般状态:C组大鼠实验期间一般状态良好,活动自如,晶状体透明;M组大鼠毛色晦暗,活动度差,晶状体混浊,二便量多;与M组相比,L组、H组大鼠的一般状态有一定程度改善。2.大鼠体重:伴随灌胃的周龄增加,C组大鼠体重逐渐增加;M组、L组、H组大鼠体重波动较大,均呈消瘦状态,三组之间体重无统计学差异（P＞0.05）。3.大鼠血糖:C组大鼠血糖呈正常平稳状态;M组、L组、H组大鼠血糖较C组显著升高（P＜0.001）;与M组相比,L组血糖虽然有下降趋势,但仅在第1周表现出统计学差异（P＜0.05）,H组则在第4周开始血糖显著降低（P＜0.05）。L组与H组之间血糖无明显差异（P＞0.05）。4.血清生化指标:8周时,与C组相比,M组TG、TC、Cys-C、UA的浓度均显著上调（P＜0.05）;与M组相比,L组TC、UA浓度降低（P＜0.05）,H组TG、TC、UA浓度均降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。L组与H组之间,TG、TC、Cys-C、UA的浓度无明显差异（P＞0.05）。5.肝肾功:8周时,各组之间血清ALT、AST、BUN、Cr浓度无显著差异（P＞0.05）。6.视网膜组织染色:C组大鼠视网膜组织内界膜完整,未见毛细血管内皮细胞嵌入,神经节细胞层细胞单层排列紧密,未见神经节细胞丢失,其余各层排列整齐,结构清晰。M组大鼠视网膜内界膜肿胀、凹凸不平,可见毛细血管内皮细胞嵌入,神经节细胞层排列紊乱,神经节细胞丢失或迁移至内界膜,内核层与外核层细胞排列紊乱,结构疏松。L组与H组相较M组,内界膜肿胀明显减轻,未见毛细血管内皮细胞嵌入,神经节细胞层相对排列规则,神经节细胞丢失较少,其余各层细胞排列较整齐。7.益气补肾方对视网膜MCP-1、TNF-αmRNA表达的影响:与C组相比,M组视网膜MCP-1、TNF-αmRNA表达显著上升（P＜0.05）;与M组相比,L组、H组视网膜MCP-1、TNF-αmRNA表达下降（P＜0.05）;与L组相比,H组视网膜MCP-1、TNF-αmRNA表达下降趋势更显著（P＜0.05）。8.益气补肾方对视网膜HO-1、Nrf2 mRNA表达的影响:与C组相比,M组视网膜HO-1、Nrf2 mRNA表达上升（P＜0.05）;与M组相比,L组未见明显改变（P＞0.05）,H组HO-1、Nrf2 mRNA表达显著上调（P＜0.05）;与L组相比,H组视网膜HO-1、Nrf2 mRNA表达显著上调（P＜0.05）。9.益气补肾方对视网膜GFAP、VEGF mRNA表达的影响:与C组相比,M组视网膜GFAP、VEGF mRNA表达显著上升（P＜0.05）;与M组相比,L组GFAP mRNA表达显著下调（P＜0.05）,VEGF mRNA表达则无明显差异（P＞0.05）,H组GFAP、VEGF mRNA表达均显著下调（P＜0.05）;与L组相比,H组GFAP、VEGF mRNA均显著下调（P＜0.05）。10.益气补肾方对大鼠视网膜GFAP、VEGF蛋白表达的影响:与C组相比,M组视网膜GFAP、VEGF蛋白表达上调（P＜0.05）;与M组相比,L组GFAP蛋白表达虽然有下降趋势,但无统计学意义（P＞0.05）,VEGF蛋白表达则出现显著下调（P＜0.05）;H组视网膜GFAP、VEGF蛋白表达则均显著下调（P＜0.05）;与L组相比,H组视网膜GFAP、VEGF蛋白表达均下调（P＜0.05）。结论1.益气补肾方可以改善糖尿病大鼠的一般状况,降低血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、尿酸水平,改善糖尿病导致的视网膜组织病理损伤。2.益气补肾方可以通过降低糖尿病大鼠视网膜炎性因子（MCP-1、TNF-α）表达,上调抗氧化相关因子（HO-1、Nrf2）,从而降低糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子与胶质纤维酸性蛋白表达,保护视网膜微血管和神经元。