【摘 要】
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目的:观察幼龄糖尿病大鼠各组早期肾小管葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的表达规律,探讨GLUT2表达和糖尿病肾病(DN)之间的关系。 方法:出生后3周健康雄性SD幼龄大鼠50只随机分成正常
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目的:观察幼龄糖尿病大鼠各组早期肾小管葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的表达规律,探讨GLUT2表达和糖尿病肾病(DN)之间的关系。 方法:出生后3周健康雄性SD幼龄大鼠50只随机分成正常组和糖尿病模型组,禁食12小时后,糖尿病组腹腔一次性注射20mg/kg的STZ,对照组采用同等体积的枸橼酸缓冲液注射,48小时后,采集两组大鼠鼠尾静脉血,微量血糖仪测血糖,代谢笼中收集的大鼠尿用尿糖试纸检测尿糖,以血糖≥16.65mmol/L或尿糖出现+++或以上,符合二者之一为糖尿病大鼠造模成功,实验期间不给予胰岛素及其他任何降糖药物。在代谢笼中密切观察并记录两组大鼠的日饮水量和24小时尿量情况。代谢笼内监测日饮水量、24h尿量变化。正常组和STZ注射后的lW组、2W组、4W组、6W组,至造模成功后称大鼠体重、血糖、血肌酐、血尿素氮等指标,取两肾并观察大体特征和称取肾重量;其中一肾用于观察肾脏组织病理学变化、免疫组化法测定肾内葡萄糖转运蛋白2的表达规律;液氮保存固定另一肾2~3min后,放入-80℃冰箱内保存,BCA法测定肾小管刷状缘膜的蛋白浓度,Western blot检测GLUT2的表达,同时应用图像分析仪对各组GLUT2的灰度值进行分析及统计学研究。 结果: l、幼龄大鼠的DM模型建立成功:各组血糖值均≥16.7mmol∕L,尿糖试纸定性检测尿糖水平在+++或以上,随时间进展糖尿病模型各组糖尿病症状逐渐明显。模型各组的尿微量白蛋白、血肌酐、血尿素氮等比正常组显著增加。 2、免疫组织化学染色结果显示:GLUT2主要在肾小管上表达,DM组肾小管GLUT2蛋白表达较对照组显著升高。糖尿病模型自1W组开始GLUT2蛋白在肾小管阳性表达,表达量逐渐增高,和1W组、2W组比,在糖尿病6W组时肾小管GLUT2的表达量最高,差异有显著意义;1W组、2W组和4W组、6W组的肾GLUT2表达量相比,4W组、6W组糖尿病大鼠肾 GLUT2表达量显著性增加;分别比较1W组与2W组、4W组与6W组的GLUT2蛋白表达量相比,肾小管 GLUT2的表达无显著差异,但显著高于正常对照组肾小管GLUT2的表达。 结论: 1. STZ可以诱发幼龄大鼠DN; 2.幼龄糖尿病大鼠肾小管以GLUT2的表达增强而上调的方式作为DN早期加速葡萄糖转运的代偿机制之一; 3.造模各组幼鼠的肾小管GLUT2蛋白表达高于正常组,和糖尿病早期肾脏组织中GLUT2的蛋白高表达相符合。
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