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N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是粘蛋白O-糖基化的起始酶,负责将供体UDP-GalNAc上的GalNAc基团转移至受体蛋白多肽链特定序列中的Ser或Thr羟基上,从而合成O-聚糖。近年来有人指出,O-糖基化可能与肿瘤的发生发展具有密切关系,因此对该酶家族的研究也受到越来越多重视。N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14(GalNAc-T14)是该家族中截止至目前最新发现的成员,由于其发现相对较晚,且对其研究尚未得以广泛重视,因此对GalNAc-T14在癌组织和癌细胞中的表达、生物学特征及功能之间的关系都需要深入研究。本论文对GalNAc-T14基因进行了以下三方面的研究:1.利用生物信息学方法分析GalNAc-T14蛋白序列,钓取了其cDNA序列,将该序列亚克隆入pET-DsbA与His-tag融合表达;并且对诱导及纯化条件进行了优化。通过免疫新西兰大耳白兔,获得多抗血清。利用双向免疫扩散检测所制备的多抗效价,通过免疫印迹方法鉴定多抗特异性,并检测GalNAc-T14在不同组织的表达情况。结果表明:制备的GalNAc-T14多克隆抗血清是高特异性的,GalNAc-T14蛋白在乳腺癌细胞和肾癌细胞中均有表达,并推测如果在肿瘤组织中发现低表达GalNAc-T14则可能显示肿瘤恶性程度较高,与肿瘤易发生转移,预后差密切相关。2.将GalNAc-T14和IGFBP-3共转染MCF-7细胞,利用confocal显微镜观察两者的共定位情况。结果表明:GalNAc-T14和IGFBP-3在细胞内存在共定位现象。3.成功构建了GalNAc-T14昆虫细胞重组表达载体。将GalNAc-T14 cDNA序列亚克隆入pMT/BIP/V5-HIS C载体,转染果蝇S2细胞系,为将来利用昆虫表达系统获得GalNAc-T14蛋白,为深入研究GalNAc-T14的功能奠定基础。总之,本论文对于GalNAc-T14功能进行了初步的研究和探讨,将GalNAc-T14与IGFBP-3进行亚细胞定位,并欲利用昆虫表达系统获得有活性的GalNAc-T14蛋白,为下一步开展工作提供了材料和依据。