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目的:研究靶向于细胞周期蛋白D1(CyclinD1)基因的小干扰RNA(smallinterfering RNA,SiRNA)体外诱导CyclinD1基因沉默对喉癌细胞增殖和调亡的影响及慢病毒介导的对实验动物移植瘤生长的抑制作用。
方法:应用靶向CyclinD1的特异SiRNA体外转染喉鳞癌Hep-2细胞,RT-PCR方法检测转染后喉癌细胞CyclinD1的表达,MTT和流式细胞仪检测喉癌细胞增殖和凋亡情况。构建喉鳞癌荷瘤裸鼠模型,应用慢病毒介导的细胞周期蛋白D1 SiRNA(Cd1-RNAi-Lentivirus)瘤内注射,观察肿瘤生长情况。切取肿瘤,RT-PCR检测实验组和对照组移植瘤组织中CyclinD1的表达,透射电镜检查移植瘤喉癌组织的超微结构,观察治疗组和对照组肿瘤形态差异,Tunel法检测喉癌移植瘤组织的细胞凋亡情况。
结果:转染siRNA后Hep-2细胞中CyclinD1 mRNA表达明显下降,喉癌细胞生长受到明显抑制,并具有时间依赖性,并检测到明显的细胞凋亡。对照组细胞CyclinD1 mRNA表达无明显下降,细胞增殖和凋亡无明显改变。动物实验显示Cd1-RNAi-Lentivirus治疗组肿瘤平均体积及平均重量均明显小于对照组。透射电镜检查结果证实治疗组肿瘤细胞内出现大量凋亡细胞,核固缩,核膜清晰,核内染色质凝聚,细胞质边集,线粒体形成空泡样改变,还可见到凋亡细胞及形成的凋亡小体。Tunel染色结果显示治疗组凋亡细胞显著高于对照组。
结论:本研究初步证实CyclinD1基因沉默能有效抑制喉癌细胞的生长,并能诱导喉癌细胞凋亡。慢病毒介导的细胞周期蛋D1-SiRNA能够在体内抑制CyclinD1 mRNA表达,对实验动物移植瘤生长有明显的抑制作用,并可诱导肿瘤细胞发生凋亡,为喉癌和其他恶性肿瘤的基因治疗提供了新的治疗靶点和理论依据。