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本论文主要研究了外源促性腺激素诱导山羊卵泡发育,活体采卵和卵母细胞体外成熟、体外受精等技术,研究结果如下:
1、不同来源FSH对120~130日龄羔山羊卵泡诱导发育效果存在差异。5mg Ovagen处理后每只羊卵巢上平均有18.3±3.5个可用卵泡(直径大于2mm卵泡),而采用5mg中国科学院动物研究所生产的FSH处理后可用卵泡数为14.9±6.7个,两者差异显著(P<0.05)。
2、采卵间隔对活体采卵效果影响不明显。间隔7d和14d用手术法采卵,每只羔羊平均可用卵泡数(13.0±4.2 vs 13.4±4.3)、卵泡直径(4.68±1.46mm vs 4.92±1.63mm)、卵母细胞回收率(78.1±14.9%vs 77.0±9.9%)、卵母细胞可用率(78.4±12.0%vs 75.6±15.6%)均无显著性差异(P>0.05)。
3、每只羊的可用卵泡数随采卵次数增加呈下降趋势,但卵泡直径和回收卵母细胞的可用率无显著性差异(P>0.05)。日龄为131~150的山羊用5mg Ovagen诱导卵泡发育后,每间隔7d采用手术法采卵,第1~4次直径大于2mm的卵泡数分别为20.1±5.6,15.5±3.2,9.3±3.7,8.7±2.5个(P<0.05),回收的可用卵母细胞数分别为11.1±3.2,8.3±1.8,6.6±3.7和6.6±1.7枚(P<0.05)。不同个体间卵母细胞回收率和可用率无显著性差异(P>0.05)。
4、2~4岁成年母羊经孕酮阴道栓处理后,分别用FSH和PMSG诱导卵泡发育,结果表明FSH组可用卵泡数(13.6±5.9个)明显高于PMSG组(8.5±5.1个)(P<0.05);PMSG组直径大于5mm的卵泡比例显著高于FSH组(16.4%vs 7.5%,P<0.05):两组间卵母细胞可用率无显著性差异(65.0±12.0%vs 69.3±2.3%,P>0.05)。在繁殖季节(4-5、8-11月)屠宰场卵巢平均采集的卵母细胞数明显高于非繁殖季节(2.9枚/个vs 1.6枚/个,P<0.05)。
5、羔羊和成年羊活体采集COCs体外培养的成熟率分别为91.3%和91.9%,无显著性差异(P>0.05):成熟液中添加10%ESG或10%FBS后对山羊卵母细胞成熟率影响不显著(86.5±12.0%vs 91.3±6.0%,P>0.05)。
6、不同级别COCs的体外成熟率有明显差异,A级为90.0%,B级为81.4%,C级为73.5%,D级为17.2%(P<0.05)。IVM卵子与精子在mSOF液孵育后的受精率和卵裂率分别为93.6%和92.4%,显著高于TALP液法(P<0.05)。来自不同级别COCs的IVM卵子,其体外受精率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05)。