口蹄疫病毒多基因的克隆、表达及基因工程疫苗实验免疫研究

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采用半巢式RT-PCR方法,克隆了FMDV O/NY00株的部分5’UTR、Lpro 基因、P2 和P3 区。发现在其基因组假结区中存在4 个保守的假结结构,而Cathay 拓扑型毒株在相应区域仅有3 个假结,推测这是一个区分ME-SA 拓扑型的PanAsia 株和Cathay 拓扑型毒株的遗传标记。O/NY00 株的IRES、Lpro和3A 基因与O/TAW/97、O/AKESU/58 和O1/Kauf/66 株的同源性较低,而与O/SKR/2000 株的同源性较高。O/NY00 株的3A 基因没有缺失。研究结果为阐明FMDV 致病机理,开发新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。 利用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统,对FMDV 3ABC 基因截短体进行了表达。表达的目的蛋白以二聚体形式存在,能分泌到上清中,占上清可溶蛋白的14%。Western Blot 检测证实其可被抗3ABCt多抗识别。 将FMD 重组鸡痘病毒(vUTAL3CP1、vUTA2-OAT)和重组DNA疫苗(pVIRIL18P1、pVRI-OAT)以不同组合方式免疫豚鼠、猪和牛,然后对其诱导的体液和细胞免疫水平进行了检测。结果表明,4 种基因工程疫苗均能诱导免疫动物产生特异性的体液及细胞免疫应答,并具有较好的强毒攻击保护作用。其中以vUTAL3CP1 两次免疫,pVRI-OAT/vUTA2-OAT 联合免疫效果最佳。该结果为进一步的大动物攻毒保护试验奠定了基础。
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