高效液相色谱法在中药复方制剂有效成分含量测定的应用研究

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中药复方制剂的质量研究关系到人类的健康及生存质量,随着中药安全问题地不断曝光,我国已加大了中药复方制剂质量的研究力度。本研究结合目前中药复方制剂现代化与国际化发展需要,针对国内外中药复方制剂质量分析现状,选择中药复方制剂中有效成分为研究对象,通过优化试样提取工艺、引入新型预处理技术,设计分析测试条件,创建了分析五种中药复方制剂有效成分的新方法。所建立的方法准确、快捷、简便,对所测中药复方制剂的质量控制研究具有实用价值。本论文研究内涵分为如下六章:第一章综述基于文献调研,对中药复方制剂的质量标准、有效成分、预处理技术、测定技术等研究现状及发展趋势加以概述。第二章高效液相色谱法在养阴清肺颗粒芍药苷、甘草苷和肉桂酸含量测定的应用研究建立以高效液相色谱法同时测定养阴清肺颗粒中芍药苷、甘草苷和肉桂酸含量的方法。通过研究提取溶剂、料液比及提取时间对试样提取率的影响,采用高效液相色谱法分离、双波长切换紫外检测实现对养阴清肺颗粒中芍药苷、甘草苷和肉桂酸的同时测定。利用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),0.2%磷酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相以1.0 m L·min-1的流速进行梯度洗脱(0-4 min,18%B→18%B,4-9 min,18%B→37%B,9-16 min,37%B→37%B),于如下波长切换程序下检测:0-6.3 min,276 nm,6.3-7.3 min,230 nm,7.3-16 min,276 nm,柱温28℃。结果芍药苷、甘草苷和肉桂酸分别在0.2368-4.736,0.1708-3.416,0.0352-0.704μg·m L-1线性关系良好,平均加标回收率分别为99.7%,98.8%,98.4%。第三章高效液相色谱法在减味紫雪口服液甘草苷和肉桂酸含量测定的应用研究建立以高效液相色谱法同时测定减味紫雪口服液甘草苷和肉桂酸含量的新方法。通过优化试样提取溶剂和提取时间,采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相0.2%磷酸溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱,程序如下:0-6 min,26%B→45%B,6-9.5 min,45%B→90%B,9.5-10 min,90%B→95%B,流速1.0 m L·min-1,检测波长276 nm,柱温28℃。结果甘草苷和肉桂酸分别在0.7676-38.38,0.04288-2.144μg·m L-1线性关系良好,平均加标回收率分别为98.4%,98.9%。第四章固相萃取-高效液相色谱法在复方乌鸡颗粒芍药苷、阿魏酸和丹皮酚含量测定的应用研究建立了采用固相萃取-高效液相色谱法同时测定复方乌鸡颗粒中芍药苷、阿魏酸和丹皮酚含量的新方法。实验通过优化色谱柱,流动相种类、酸度及比例,试样提取方式、提取溶剂、提取时间及固相萃取淋洗液、洗脱液及洗脱体积后,最终试样经超声提取,HYPERSEP Retain-PEP固相萃取柱净化富集后,采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以1.0%磷酸(A)-乙腈(B)为流动相,在流速为1.0m L·min-1下梯度洗脱(0-4 min,22%B→22%B,4-5 min,22%B→30%B,5-8 min,30%B→45%B,8-9 min,45%B→59%B,9-13 min,59%B→69%B),并于该波长切换程序下检测:0-8 min,230 nm,8-10 min,321 nm,10-15 min,274 nm,柱温为28℃。结果芍药苷、阿魏酸和丹皮酚分别在3.12-312μg·m L-1,0.246-24.6μg·m L-1和0.0896-8.96μg·m L-1线性关系良好,平均加标回收率分别为98.6%,96.3%,99.9%。第五章高效液相色谱法在妇科养坤丸芍药苷、甘草苷、黄芩苷和木香烃内酯含量测定的应用研究研究了高效液相色谱法同时测定妇科养坤丸芍药苷、甘草苷、黄芩苷和木香烃内酯含量的新方法。利用响应面分析法(Response surface methodology,RSM)对妇科养坤丸中四种有效成分的提取工艺予以优化。采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.2%磷酸溶液(A)和乙腈(B)为流动相以流速1.0 m L·min-1于柱温28℃进行二元梯度洗脱(0-6 min,23%B→23%B,6-7 min,23%B→25%B,7-12 min,25%B→80%B,12-13 min,80%B→95%B),波长切换检测(0-6 min,230 nm,6-8 min,276 nm,8-13 min,280 nm,13-17 min,225 nm)。结果芍药苷、甘草苷、黄芩苷和木香烃内酯分别在1.616-161.6,0.4318-43.18,1.3248-132.48及0.5184-51.84μg·m L-1线性关系良好,平均加标回收率分别为97.5%,99.7%,96.3%及97.0%。第六章固相萃取-高效液相色谱法在复方消痔栓没食子酸、大黄酸和大黄素含量测定的应用研究建立了采用固相萃取-高效液相色谱法同时测定复方消痔栓中没食子酸、大黄酸和大黄素含量的新方法。采用HYPERSEP C18固相萃取柱对样品净化、富集,应用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.5%磷酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相,二元梯度洗脱(0-4 min,22%B→22%B,4-5 min,22%B→30%B,5-8 min,30%B→45%B,8-9 min,45%B→59%B,9-13 min,59%B→69%B),检测波长:273,254nm,流速:1.0 m L·min-1,柱温:28℃。结果没食子酸在0.2964-14.82μg·m L-1,大黄酸在0.215-10.75μg·m L-1,大黄素在0.3072-15.36μg·m L-1线性关系良好,其平均加标回收率依次为:95.1%,95.9%,97.8%。
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