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目的：本研究旨在体外筛选出升陷汤抑制人肺癌A549细胞侵袭转移的有效萃取部位，并对其分子机制进行探讨，为中药复方的研究提供可行的方法。 方法： 1药物制备：升陷汤有机溶剂萃取部位，由华北制药集团新药研发有限责任公司制备。 2四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)筛选抗肿瘤活性部位：取对数生长期肿瘤细胞，调整细胞浓度为1×105/ml，接种于96孔培养板，每孔90μL，实验组各孔加入升陷汤不同部位萃取成分20μl，使其终浓度分别为400、200、100、80、40、20 mg/L；阴性对照孔加入完全培养基；每组均设4个复孔，置于饱和湿度、37℃、5％CO2培养箱中分别培养24 h、48 h、72h，各孔加入MTT(5mg/ml)20μl，继续培养4 h，弃去培养上清，每孔加入DMSO150μl，混匀后以测定波长492 nm、参考波长620 nm检测各孔光密度(OD)值，计算升陷汤不同部位萃取成分对细胞增殖的抑制率。 3 Annexin V/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率：分别以20、40和80 mg/L的升陷汤正丁醇提取物作用于A549细胞24 h，弃培养基，0.25％胰蛋白酶消化收集细胞，用冷PBS洗涤细胞两次。用400ul1×Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1×106/ml。在细胞悬浮液中加入5μlAnnexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8℃避光条件下孵育15分钟。加入10μlPI后轻轻混匀，于2-8℃避光条件下孵育5分钟。在1小时内用流式细胞仪检测。 4细胞划痕实验：取对数生长期的A549细胞，调整细胞浓度为1×105/ml，均匀接种于六孔板内，每孔1.8mL，待细胞贴壁完全后，用移液器尖在每个孔内划一道痕，用PBS轻轻洗涤除掉脱落的细胞，实验组各孔加入不同浓度的正丁醇提取物各200μl，使其终浓度分别为20、40、80 mg/L；阴性对照孔加入完全培养基；每组均设2个复孔，置于饱和湿度、37℃、5％CO2培养箱中培养，24 h后观察并照相。 5细胞迁移性测定：取对数生长期A549细胞，0.25％胰酶消化，用不含胎牛血清的RPMI1640培养基洗细胞3次，配制细胞悬液，调整浓度为1×105/ml，于Transwell小室的上室中加入不同的细胞悬液：实验组各孔加入不同浓度的正丁醇提取物200μl，使其终浓度分别为20、40、80mg/L，阴性对照孔加入完全培养基，每组设3个复孔；下室加入600μl无胎牛血清的RPMI1640培养基，37℃，5％CO2培养箱中孵育24 h。取出Transwell小室，用PBS洗2遍，棉拭子擦去膜上面未迁移的细胞，4％多聚甲醛-PBS固定20min，HE染色，取下带有细胞的聚碳酸酯膜，反面朝上，以Olympus相差显微镜观察并拍照，每个样片随机取4个视野拍照并计数，计算平均值。每组重复5次。 6 Western blot检测细胞侵袭、转移相关蛋白MMP2、MMP9表达水平：取对数期A549细胞，加入不同浓度正丁醇提取物或者RPMI1640培养基，于37℃、体积分数为5％的CO2培养箱中培养24 h后，用预冷的PBS洗3遍，刮下细胞，蛋白提取试剂盒提取总蛋白，加入一定量的4×上样缓冲液，沸水浴中煮沸5 min。用质量分数为20％的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，分离的蛋白电转移至PVDF膜后，用脱脂牛奶室温封闭1h，一抗4℃孵育过夜，PBS-T洗膜20 min×3次，加入红外线标记的二抗(IRDye800-LI-COR，odyssey)，37℃反应2h，PBS-T洗膜20 min×3次，用Odyssey双色红外荧光扫描系统进行检测。 结果： 1升陷汤正丁醇提取物明显抑制肺癌细胞的增殖，MTT检测结果显示，80-400mg/L升陷汤正丁醇提取物处理肺癌细胞A549细胞24、48、72h后均能明显抑制细胞的增殖活性。 2升陷汤正丁醇提取物诱导肺癌细胞凋亡，高于80mg/L的正丁醇提取成分对A549细胞具有凋亡诱导作用。 3细胞划痕实验结果显示低浓度升陷汤提取物(20、40mg/L)虽不能明显抑制肺癌细胞的增殖和凋亡，但能够抑制细胞的迁移。 4 Transwell小室迁移实验结果显示：经20、40和80mg/L升陷汤提取物处理A549细胞24h后，穿过小室基底膜的细胞数量明显减少，呈浓度依赖性，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)。 5升陷汤正丁醇提取物对肺癌细胞侵袭转移相关蛋白的影响经20、40和80 mg/L升陷汤提取物处理A549细胞24h后，基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达均下降，证实升陷汤正丁醇提取物通过降低ERK通路的活性来抑制MMP-2和MMP-9的表达，从而抑制了A549的侵袭和转移。 结论： 本文实验结果发现高浓度(＞80mg/L)的升陷汤正丁醇提取物对肺癌细胞具有生长抑制作用，且通过诱导细胞凋亡而实现。低浓度(＜80mg/L)升陷汤正丁醇提取物能够抑制肺癌细胞的侵袭和转移，并且随着浓度的增大，这种侵袭、转移的能力也随之增强；并与基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达降低有关。进一步的研究发现，ERK信号转导途径参与了升陷汤提取物对A549细胞侵袭转移的抑制作用。