肺癌转移动物模型的建立及活体成像观察

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目的:建立了肺癌转移动物模型,采用分子病理学方法检测肿瘤转移相关基因表达,验证部分关键microRNA对人肺癌高转移细胞系SPC-A-lsci侵袭和迁移能力的影响;应用小动物活体成像技术,以肺癌动物模型为主要对象,建立荧光报告基因的细胞转染方法,活体观察肺癌动物模型的发生、发展及转移,为小动物活体成像技术在肿瘤动物模型中应用提供参考依据。方法:采用小鼠尾静脉注射方法观察长期传代的高、低转移细胞系的转移特性;通过Western blot、FICC、IHC等分子病理方法检测已知转移转移促进基因CD44,OPN, MMP-9,EGFR在高、低转移细胞系间的差异表达;采用siRNA干扰技术,筛选对人肺癌高转移细胞系SPC-A-lsci侵袭和迁移能力有影响的microRNA.通过慢病毒转染技术建立肺癌荧光报告基因稳转细胞,进而建立相应的肺癌动物模型,采用小动物活体成像技术观察模型的成像效果,观察指标包括标记率、灵敏度、光子信号面积,光子信号强度等。结果:动物体内实验表明8周时高转移细胞系的肺转移率为100%(12/12),而低转移细胞系的肺转移率仅为16.67%(2/12)。与低转移细胞系相比,转移促进基因CD44, OPN,MMP-9,EGFR在高转移细胞中的表达均显著上调。选择23个差异显著的microRNA进行细胞水平的转移潜能筛选,发现过表达microRNA148a和microRNA200c能显著降低人肺癌高转移细胞系SPC-A-lsci的侵袭和迁移能力,而对microRNA148a和microRNA200c进行siRNA干扰则能显著提高人肺癌低转移细胞系SPC-A-1的侵袭和迁移能力。建立了GFP和GFP/Luc双标记报告基因的细胞转染方法,标记了SMMC-7721,SPC-A-1, SPC-A-lsci,NCI-H460, MDA-MB-231sci等5个细胞系,标记率达90%以上。小动物活体成像系统的灵敏度,体外水平为100个GFP细胞,体内水平为1×105个GFP细胞或100个Luc细胞。建立了小鼠皮下移植瘤模型和原位移植瘤模型的小动物活体成像实验技术,观察了肿瘤生长、转移等生物学特性。结论:建立了肺癌转移动物模型,采用分子病理方法观察肺癌动物模型转移相关的生物学特性,应用小动物活体成像应用技术并活体观察肺癌动物模型的生长、转移,为肿瘤动物模型的推广应用和临床肺癌防治研究提供了参考依据。
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