【摘 要】
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镉作为最具毒性和不可生物降解性的重金属已经导致多起公共危害事件。本文从池塘浅层底泥中筛选出一株Alcaligenes faecalis(粪产碱杆菌)K2,将其在Cd2+胁迫下合成并分泌的含有有机氮化合物和镉盐矿物的混合物命名为分泌型有机生物矿物(Secretory organic biominerals,SOBs)。采用了细胞亚分级结构镉分布分析、微观形貌和结构表征、蛋白组学、生物膜反应器等方法,
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镉作为最具毒性和不可生物降解性的重金属已经导致多起公共危害事件。本文从池塘浅层底泥中筛选出一株Alcaligenes faecalis(粪产碱杆菌)K2,将其在Cd2+胁迫下合成并分泌的含有有机氮化合物和镉盐矿物的混合物命名为分泌型有机生物矿物(Secretory organic biominerals,SOBs)。采用了细胞亚分级结构镉分布分析、微观形貌和结构表征、蛋白组学、生物膜反应器等方法,研究了K2对溶液中Cd2+的去除效果和除镉机制。本文完成的工作和获得的成果如下:(1)成功筛选并鉴定一株Alcaligenes faecalis K2,在Cd2+的刺激下,K2的体长变短,有利于增加比表面积并加快物质交换。K2以分泌大量SOBs的方式将胞内镉矿化并外排,且SOBs干燥后可以作为Cd2+的高效吸附剂。(2)K2对Cd2+的最高适应浓度达125 mg/L。在Cd2+初始浓度为75 mg/L时,K2表现出最高的Cd2+去除率为85.5%,溶液中去除的Cd2+有50.6%固定在SOBs中。K2细胞壁对Cd2+的阻隔效果相对较弱,主要以分泌SOBs的形式将镉外排来保障细胞生命活动。(3)K2产出的SOBs可用400目滤网收集,利用SEM对SOBs的微观形貌进行观察,并使用FITR、XPS和HRTEM对其结构组成进行分析。发现SOBs主要由包裹纳米镉盐的有机颗粒组成,包含大量含氮化合物。有机颗粒随Cd2+浓度升高而逐渐碎片化,其中包裹的镉盐成分为较为稳定的Cd S、Cd(OH)2和Cd CO3。(4)通过label-free蛋白组学分析了K2在Cd2+压力下的差异表达蛋白。在镉胁迫144h后,K2上调了三羧酸循环系统的蛋白质的表达以满足更高的能量消耗。这些能量被用来进行细胞氧化解毒与热修复;满足大量SOBs胞吐所需;并使K2得以进行更剧烈的趋化运动。与此三者相对应的过氧化氢还原酶、细胞膜组成蛋白、鞭毛蛋白也被过表达。(5)将SOBs在60℃干燥后作为吸附剂,其对溶液中Cd的吸附能力达77.1 mg/g。将K2负载在MBBR反应器中,在45天的两阶段实验中,生物膜除镉效率稳步上升,对75 mg/L的Cd2+去除率达到90%。本文从K2的除镉效果到机制进行了系统研究,作为一种高效除镉细菌,K2以矿化的方式持续对溶液中Cd2+的去除,产出一种可作为Cd2+吸附剂材料的SOBs。相对于传统的单纯利用菌体或细菌分泌物的研究,本论文提供了一种更立体的处理方式,实现了微生物的连续工作,减少了污泥的产生,更大效率利用原料,为微生物除镉拓展了新的思路,是一种具有前景的微生物除镉技术。
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