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乙酸乙酯是工业上十分重要的一类芳香酯,广泛应用于食品、医药、纺织等领域中,其合成方法一直受到重视。目前对于乙酸乙酯的生产主要集中在化学催化法合成或从天然植物中分离提取来获得,酶法催化合成乙酸乙酯的文献鲜有报道。本论文对展示稻米脂肪酶的毕赤酵母的量产工艺进行了优化,对毕赤酵母展示稻米脂肪酶生产乙酸乙酯的工艺进行了优化研究。首先针对本实验室自主构建的毕赤酵母表面展示稻米脂肪酶的菌体富集和产酶条件进行优化。参考Invitrogen公司操作手册的条件,优化后的最佳条件是:诱导富集培养基甘油含量为2.00%,装液量为20 mL/250 mL,转速为180 r/min,甲醇的添加量为1.00%,诱导5 d,酶活力由优化前的11370 U/g升高到16287 U/g。其次,本研究对毕赤酵母展示的稻米脂肪酶催化乙酸乙酯的反应条件进行了系统地探索和研究。结果表明:在15 mL正己烷为溶剂的反应体系中,稻米脂肪酶的添加量为4g/mL(相当于15750 U/g酶用量),3A分子筛的添加量为1.2 g(相当于8.00%的添加量),底物摩尔比(乙酸:乙醇)为1.2:1,在40℃条件下振荡反应4 h,合成乙酸乙酯的的转化率可达到90.92%。在系列单因素优化的基础上,利用Design-Expert 8.06软件将催化合成乙酸乙酯的反应条件进行优化设计,分析得到:在15 mL正己烷的反应体系中,反应温度35.73℃,酶用量4.07 g/mL和底物醇酸摩尔比为1.22:1,另外分子筛1.20g,反应时间为6 h。在此最优条件下进行多次重复试验,最终得到乙酸乙酯的平均产率达到91.57%,与实验预测值90.92%相比,相对误差为0.72%。考察了全细胞催化剂催化合成乙酸乙酯的重复利用性,稻米脂肪酶重复利用6次后,乙酸的转化率仍然可以达到83.10%。在响应面优化的基础上,利用减压蒸馏的方式对乙酸乙酯实现了初步的分离提纯,用气相色谱等对样品进行检测,结果表明:产品纯度可达97.10%。本研究为毕赤酵母展示的稻米脂肪酶生产乙酸乙酯提供了依据。