我们以往的研究证实，适度的低浓度酒精刺激可使胃粘膜细胞更新加快，引起胃粘膜适应性细胞保护作用，但其机制尚不清楚。低浓度酒精作为弱刺激物，可使胃粘膜受到轻度的氧化应激损伤。热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是细胞内普遍存在的一组应激蛋白，在细胞受到热、酒精、重金属、代谢毒素等有害刺激时表达明显增加，从而增强细胞对伤害性刺激的耐受力，避免细胞受损伤。分子量为70KD的HSP70是HSP家族中的主要成员，它能够稳定应激时细胞内的蛋白结构，修复和清除损伤的蛋白质。HSP70在对抗胃粘膜损伤及胃溃疡愈合过程中也有重要作用，它具有增加胃粘膜抗损伤能力、促进胃粘膜修复的功能。因此我们推测，慢性酒精刺激能促进胃粘膜HSP70的表达，表达增加的HSP70可能调控胃粘膜干细胞的增殖与分化，并引起胃粘膜适应性细胞保护现象的产生。为证实以上假说，本研究在以往建立的慢性饮酒动物模型的基础上，设计并进行了以下两部分实验：(1)观察低浓度酒精刺激对胃粘膜HSP70表达的影响；(2)研究HSP70的表达与胃腺干细胞增殖及适应性细胞保护作用之间的关系。 第一部分 以6％(v／v)酒精水溶液作为大鼠饮水的唯一来源，建立慢性饮酒动物模型。分别在大鼠饮酒的不同时程(1天、3天、7 南京医科大学硕士学位论文天、14天和 2 8天）取胃粘膜，用 RT－PCR法观察胃粘膜 HSP70 nnNA的表达，用免疫组化法观察HSP7O阳性细胞在胃粘膜的分布情况。结果发现，HSP70 mRNA在对照组大鼠的胃粘膜仅有轻度表达，4k用低浓度酒精后HSP7O mRNmRNA明显增多。HSP70阳性细胞散在分布于正常大鼠胃粘膜的基底部且数目较少，饮酒后大鼠胃粘膜的HSP70阳性细胞明显增多。饮酒3－14天的大鼠，在胃粘膜的表面、胃腺颈部和基底部均有HSP70阳性细胞分布，分布子胃腺颈部的HSP70阳性细胞经PCNA和HSP70免疫双重染色证实为胃腺千细胞。而饮酒1天及28天的大鼠HSP70阳性细胞仅分布于胃粘膜表面区域，胃腺颈区极少见到。本研究结果表明，低浓度酒精刺激可使胃粘膜HSP7O表达增加，而饮酒3一14天的 大鼠胃粘膜干细胞 内HSP70白表达可能与干细胞的增殖分化有关。 第二部分 大鼠分为四组，第一组（对照组厂 饮用自来水；第二组（酒精组厂饮用6讹 精水溶液3天；第三组（酒精＋椭皮素组厂饮用 6趴酒精水溶液 3天，同时每隔 12h给予根皮素（100mg／kg）灌胃一次；第四组（栅皮素组广 懈皮素（10Om吵9每12h灌胃一次；持续3天。以损伤指数为指标，观察以上各组大鼠100阶 精Zml灌胃后的胃粘膜棚程度；用免疫组化法和Western blot法观察掀皮素对HSP70表达的抑制作用；用流式细胞仪及免疫组化法检测胃粘膜细胞的增殖及凋亡情况。结果友现：栅皮素＊om叭乡可有效阻断低浓度酒精刺激引起的HSP70蛋白过度表达。淑皮素抑制HSP70蛋白表达后，饮酒大鼠胃粘膜增殖细胞数减少、凋亡细胞数增加，低浓度酒精刺激引起的胃粘膜适应性细胞保护作用几乎完全消失。本研究结果表明，胃粘膜干细胞内HSP70表达增加是慢性低浓度酒精刺激引起的细胞增殖加快和胄粘膜适应性细胞保护现象产生的重要原＠。 通过以上研究，我们得出以下结论： 1、慢性低浓度酒精刺激可使大鼠胃粘膜H肥川表达增加。 2、慢性低浓度酒精刺激引起的胃粘膜干细胞内H蚊叩表达增 ／） 南京医科大学硕士学位论文 加是胃粘膜干细胞增殖加快的重要原因。 3、胃粘膜干细胞增殖加快是慢性低浓度酒精刺激引起的胃粘膜 适应性细胞保护作用的重要机制。