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目的:明确转录因子Pokemon对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)干细胞干性特征的促进作用,初步探讨Pokemon促进TNBC干细胞干性特征的作用机制,为TNBC尤其是难治性TNBC的治疗提供潜在靶点。方法:以体外培养的人TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T为实验对象,通过Transwell实验检测沉默Pokemon后TNBC细胞的侵袭能力变化情况;通过微球体培养实验检测沉默Pokemon后MDA-MB-231和HS-578T细胞形成微球体的数目及体积的变化情况;通过Aldeflour测定法检测在MDA-MB-231和HS-578T细胞中沉默Pokemon后乙醛脱氢酶ALDH+干/祖细胞亚群比例变化情况。为探索Pokemon调控TNBC干细胞干性特征的初步作用机制,通过全基因组表达谱芯片筛选出在MDA-MB-231细胞中沉默Pokemon后变化最大的干性因子,并通过TCGA数据库分析其与Pokemon的相关性,再进一步通过qRT-PCR及Western blot技术验证Pokemon下调后该干性因子的变化情况;此外,通过放线菌酮示踪试验及蛋白酶体抑制剂MG132阻断实验进一步探索Pokemon调控该干性因子的具体机制,初步判断Pokemon降低该干性因子的稳定性是否通过蛋白酶体途径。最后,通过比对与该干性因子泛素化相关的E3连接酶、全基因组芯片、Chip-seq芯片找出相关的E3连接酶并通过qRT-PCR及Western blot验证,筛选出关键E3连接酶。结果:1.通过Transwell实验明确在MDA-MB-231和HS-578T细胞中沉默Pokemon能抑制细胞的侵袭能力。2.通过微球体培养实验证实沉默Pokemon显著抑制了TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T形成的微球体的数目和体积;通过Aldeflour测定法证实沉默Pokemon降低了MDA-MB-231和HS-578T细胞中ALDH+干/祖细胞群的比例。3.通过全基因组表达谱芯片检测,显示沉默Pokemon可以下调一系列干细胞相关指标,其中ZEB1的表达下调倍数最大,为2.16倍。4.通过TCGA数据库分析发现在TNBC中Pokemon与ZEB1表达成明显正相关。5.在MDA-MB-231和HS-578T细胞中沉默Pokemon后ZEB1的mRNA水平和蛋白表达水平明显下降。6.放线菌酮示踪实验表明在Pokemon沉默的MDA-MB-231、HS-578T细胞中,ZEB1蛋白降解的半衰期明显缩短;用蛋白酶体抑制剂MG132处理MDA-MB-231、HS-578T细胞可以部分逆转Pokemon敲低引起的ZEB1蛋白的降解。7.通过比对ZEB1相关的E3连接酶、全基因组芯片、Chip-seq芯片找出相关的E3连接酶并通过qRT-PCR及Western blot验证,筛选出关键E3连接酶NEDD4L。结论:Pokemon可促进TNBC干细胞特征维持,其机制可能与NEDD4L抑制ZEB1泛素化蛋白酶体途径降解有关。