一种新型的具有支持介质的制备型垂直流电泳系统的研究

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电泳技术是进行分离纯化的重要手段,因其较高分辨率、回收率,较广的可开发性等优势使其在多类物质(生物和非生物)的分离检测中发挥了重要作用。电泳技术发展至今,多为微型或者不连续,以分离制备为目的的电泳装置研究较少,为此,本文尝试提出了一种连续分离的制备型的垂直流电泳,通过装填一定支持介质,减少其在垂直流过程中容易发生的对流扩散,即一款具有支持介质的制备型垂直流电泳装置,通过运行设计,形成了一个具有支持介质的制备型垂直流电泳系统,通过对该系统的运行稳定性、分离制备性展开考察,证明了该系统的可用价值。在系统的设计上,主要包括制备型垂直流电泳装置、样品进样系统、背景缓冲液进样系统、电极缓冲液循环系统、冷却循环系统、样品收集系统及电泳电源七部分;在装置的设计中,主要结构由分离室、离子交换膜、电极室和冷却循环进水室。在对该系统的稳定性运行考察上,无电压下以溴酚蓝为样品,观察其在分离室的运动轨迹,运动呈线性,进出口基本对应,表示该系统内部不存在漏液及较大偏移;在施加电压下,研究得知,在175 V内的电压-电流曲线具有较好的线性效果,在对装置承受的电压上限考察中,得出上限电压为175 V。暨对系统的稳定性考察之后,通过实验设计,利用该系统以区带电泳的形式,通过连续进样,实现了混合蛋白(牛血清白蛋白和细胞色素C)的分离,论证了该装置的实用价值。为了得到较好的分离效果和分辨率,在100 V电压下,以分离过程、条带分辨率、出水蛋白分布图及SDS-PAGE图为评判依据,优化出了实现混合蛋白分离的最佳背景缓冲液流量为0.183 mL/min,最佳背景缓冲液浓度为40 mM,最佳样品流量为0.04mL/min。初步研究表明,自主设计的具有支持介质的制备型垂直流电泳系统能实现简单混合蛋白分离,其在复杂蛋白分离甚至其他带电物质的分离上也具有一定的应用潜力;例如,剩余污泥作为一种放错位置的资源,其通过碱解得到的水解液中蛋白占据较大比例,核酸多糖也占有较大比重,这些生物大分子均具有两性,在一定条件下能表现出差异化的质荷比,通过电泳过程可以实现这些物质的分类回收,这对剩余污泥资源化具有较大意义。凭借电泳的基础,该装置还有较大的可开发空间。
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