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家兔皮肤癣菌病(Dermato-mycosis)是由多种皮肤丝状菌引起的具有强烈传染性的人兽共患皮肤真菌病,危害极为严重。其主要病原有犬小孢子菌、须癣毛癣菌和石膏样小孢子菌。近年来,临床上大量使用毒副作用较强的抗真菌化学药物造成真菌耐药性迅速发展,而毒副作用较小的天然药物中多味药均具有抗真菌活性。为了有效利用丰富的中药资源,本研究筛选出20味中药中体外抗菌活性较强的几味中药,并研究其联合抑菌活性,从而将无拮抗作用的几味中药组方制成制剂用于临床观察其疗效及毒性研究。相关的研究结果如下：1.20味中药的体外抗真菌活性的研究：通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法提取20味中药中的抗菌活性部位,采用液体微量稀释法(Broth Microdilution Susceptibility Method,M38-A)测定其对石膏样小孢子菌等四株真菌的体外抗菌活性；并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌活性。研究结果：射干、白鲜皮、五倍子和苦参四味中药提取物对四株真菌的最低抑菌浓度值(Minimal inhibitory concentration,MIC)范围在1.563～12.5 mg/ml,姜黄、杜仲、赤芍、栀子、连翘和柴胡6味中药提取物的MIC值范围在6.25～50 mg/ml;选取其中抑菌活性强的五倍子、姜黄、射干和栀子进行联合抑菌活性的研究,得出射干、姜黄和栀子的联合抑菌指数(FICI)≤2,五倍子和射干、姜黄、栀子的联合抑菌指数(FICI)>2o上述结果表明：射干、五倍子、姜黄、栀子对四株真菌均具有较好的体外抗真菌活性；射干、姜黄、栀子为无关或相加、协同的作用,可用于组方研究；五倍子和射干、姜黄、栀子为拮抗作用。2.中药原药鉴定及提取工艺的研究：按照《中国药典》2010年版一部中规定的方法,通过薄层层析法将筛选出来的无拮抗作用的姜黄、射干、栀子三味中药,进行原料药的鉴定；并采用正交设计试验,综合考虑提取方法、溶剂、料液比、提取次数、提取时间等五种影响因素,以浸膏得率及其最低抑菌浓度(MIC)值为指标,对三味中药有效物质提取工艺进行优化。研究结果：三个供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,各味药最佳的提取工艺分别为：姜黄粗粉(20目)80%乙醇溶液(6倍量),加热回流提取3次,每次2h；射干粗粉(20目)70%乙醇溶液(10倍量),加热回流提取3次,每次2h；栀子粗粉(20目)80%甲醇溶液(6倍量)浸泡0.5h后超声提取2h。上述结果表明：姜黄、射干、栀子三味中药均符合药典中的标准药材,且最佳提取工艺下姜黄、射干、栀子三种提取物浸膏对四株真菌的MIC值和分别是31.25mg/ml、25mg/ml、18.75mg/ml,抑菌效果明显且提取工艺稳定可行,3.“姜射栀,,中药配方涂膜剂的研制及质量控制：通过均匀试验设计,以体外联合抑菌活性的MIC值为参考指标,筛选出姜黄、射干、栀子三味药联合的最佳配比。以最佳配比设置低、中、高三个剂量为主药的配方涂膜剂,并通过正交试验设计筛选涂膜剂的各个条件,研制出三个剂量的配方涂膜剂,以高效液相色谱法测其中姜黄素含量。结果表明,姜黄、射干、栀子配方的最佳配比为4：3：2,三个剂量的配方涂膜剂配方如下：成膜溶液的添加量为PVA1788 8%、甘油2%；三味主药按最佳配比混合添加比例分别为2.25%、6.75%、20.25%;增溶剂吐温-80添加量分别为4%、5%、5%；透皮促进剂添加比例为5%的1,2-丙二醇、8%的冰片；最佳制备工艺下低、中、高剂量的配方涂膜剂中姜黄素含量分别为：1.62μg/ml、3.74μg/ml、7.82μg/ml.4.“姜射栀”中药配方涂膜剂的抗家兔感染皮癣菌的研究：用犬小孢子菌标准菌株人工感染健康家兔,采取有皮肤症状家兔的皮屑、被毛,进行真菌学分离培养及鉴定以确定真菌菌悬液造模成功的最低浓度。采用最低浓度的菌悬液造模。分别用2.25%、6.75%、20.25%姜射栀中药配方涂膜剂通过皮肤涂擦法治疗家兔真菌皮癣病,并作疗效对比观察。结果表明,通过培养特性、菌落性状、菌丝形态、孢子性状特征等鉴定,确定造模成功的最低犬小孢子菌菌悬液的浓度为1×108CFU/ml; 6.75%、20.25%剂量组的配方涂膜剂对家兔真菌皮癣病均有较好的疗效,其中20.25%配方涂膜剂对于家兔人工感染真菌皮癣病有治愈作用。5.“姜射栀”中药配方涂膜剂的安全性评价：考虑到舔舐等原因,本研究对姜射栀中药配方涂膜剂进行经口急性毒性试验,以改良寇氏法测定组方涂膜剂的半数致死量；姜射栀配方涂膜剂为外用药物,因而通过经皮急性毒性试验、皮肤刺激性试验、皮肤过敏性试验、眼刺激试验和黏膜刺激性试验对此涂膜剂进行毒理学研究。结果表明：配方涂膜剂的经口急性毒性试验中,用药量达到.5000mg/kg时,大鼠仍无死亡情况,属于无毒药物；配方涂膜剂经皮急性毒性试验中,用药量达到：5000mg/kg时,家兔亦无异常反应,属于无毒药物；配方涂膜剂对完整皮肤以及破损皮肤均无刺激性,亦无引起家兔皮肤过敏反应；家兔眼睛和口腔粘膜对配方涂膜剂刺激反应程度均属无刺激性。上述结果表明：姜射栀中药配方涂膜剂在家兔皮癣病治疗中是安全药物,可以长期使用。