【摘 要】
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丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根和根茎,已广泛应用于各种心脑血管疾病的治疗。水杨酸结合蛋白(SA binding protein 2,SABP2)最初在烟草中发现,属于α/
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丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根和根茎,已广泛应用于各种心脑血管疾病的治疗。水杨酸结合蛋白(SA binding protein 2,SABP2)最初在烟草中发现,属于α/β折叠水解酶家族,能特异性地与水杨酸(SA)结合,在SA信号途径中具有重要作用。本实验以丹参悬浮细胞为材料,从丹参悬浮培养细胞中克隆出了一条丹参SABP2基因,并对其cDNA和氨基酸序列进行生物信息学分析。构建了原核表达载体与过表达载体,用IPTG体外诱导得到了SABP2蛋白,测定了蛋白的酯酶活性。用qPCR方法测定了丹参悬浮细胞中SABP2基因在SA诱导后的相对表达量。取得了以下主要结果:1、从丹参悬浮培养细胞中克隆获得了一条SABP2基因,得到cDNA全长为1221 bp,开放阅读框为780 bp,能够编码259个氨基酸,命名为SmSABP2。2、生物信息学分析预测SmSABP2编码的蛋白分子量为28.81 kDa,等电点为5.48。对SmSABP2的氨基酸序列分析结果显示,其多肽链表现为疏水性,属于疏水性蛋白,N端不具有信号肽。螺旋卷曲预测表明,该基因不存在螺旋卷曲结构。二级结构预测表明,SmSABP2由44.79%的α螺旋,20.85%延伸链,28.19%无规则卷曲和6.18%的β折叠组成。SmSABP2整条肽链位于细胞膜表面,无跨膜结构。对Sm SABP2的功能结构域分析结果表明,SmSABP2属于酯酶家族,含有一个Abhydrolase6结构域和一个亲核肘状结构域(nucleophilic elbow)。3、构建了SmSABP2的原核表达载体,用IPTG体外诱导得到了SmSABP2蛋白,检测发现该蛋白具有良好的酯酶活性。用SA处理后,SmSABP2的相对表达量持续升高,说明SmSABP2强烈响应SA的诱导。4、构建了SmSABP2的过表达载体,为后续丹参的转化和探讨SmSABP2在植物次生代谢过程中的功能鉴定了基础。
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