研究背景:原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC),是恶性肿瘤,生存期很短,且发病率仍在逐年递增,我国肝癌患者占世界肝癌病例的一半。糖皮质激素(glucocorticoid,GC)是临床常用的药物之一,并常作为化疗方案中的必要组成。有意思的是,关于糖皮质激素在肿瘤治疗中的作用,评价却众口不一。一般认为,糖皮质激素可改善肿瘤患者化疗中的多种毒副作用,提高患者对化疗的耐受度。吊诡的是,患者对化疗耐受性的提高,往往也意味着肿瘤细胞对化疗耐药性的升高。并且,糖皮质激素具有很强的免疫抑制作用。传统的观念认为,免疫系统是机体抑制肿瘤发生、发展和转移的重要屏障,糖皮质激素的应用不可避免的将抑制机体的免疫效应,消弱免疫系统的这些抗肿瘤的免疫编辑(Immunoediting)作用。不少研究者发现,糖皮质激素具有诱导血液肿瘤细胞凋亡的作用,但对实体瘤细胞的凋亡却有抑制作用,从而影响化疗的效果,据此建议再化疗时不用糖皮质激素药物。免疫反应、炎症与肿瘤之间的关系非常错综。与多数人的观点相反,肿瘤免疫的发现者Prehn教授长期以来坚持免疫反应促进肿瘤的发展,因而建议通过抑制免疫治疗肿瘤。从病理学的角度看,免疫反应在组织形态学上就是炎症反应。而炎症对肿瘤的发生和发展的促进作用是举世公认的。有意思的是,上述貌似截然相反的观点在生物相对论的原则下得到了统一。生物相对论认为,生物的寿命与繁殖力呈反向关系。免疫反应对肿瘤细胞具有杀伤作用,使肿瘤细胞的平均生存缩短。在免疫/炎症和其它环境应激因素的选择压力下,肿瘤细胞必须通过不断繁殖来保证生存。这种微进化的结果就是,压力越大,肿瘤细胞的生存期越短,其繁殖力越强,恶性度越高,而患者的生存期越短。从生物相对论的原则出发,我们推测,糖皮质激素或可通过抑制肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的分裂增殖,并减少其向其他器官转移的压力,从而使患者的生存受益。我们用小鼠的肝癌模型进行了初步研究。小鼠Hepa22肝癌模型属于同种移植模型,引进我国五十多年来,已经广泛地应用于肿瘤的基础研究。本研究应用小鼠H22腹水型及皮下移植型肝癌模型,观察地塞米松这一临床常用的糖皮质激素对H22肝癌的生长、荷瘤小鼠的生存状态及生存期的影响,并进一步进行地塞米松与化疗药的作用比较,探讨化疗药对小鼠H22肝癌的影响。利用小鼠来研究其小鼠肝癌,通过延长小鼠的代瘤生存期,为地塞米松治疗肿瘤、延长带瘤生存提供相关的依据,并为减少细胞凋亡而抑制肿瘤生长的观点提供直接的实验证据。目的通过建立小鼠H22腹水型肝癌模型,观察地塞米松和5-FU对小鼠生存期及腹水量的影响。通过建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型,观察地塞米松和5-FU对小鼠抑瘤率及生存期的影响。并进一步通过流式细胞仪和Realtime-PCR,分析地塞米松对H22肿瘤的细胞凋亡、细胞周期、糖皮质激素受体的表达的影响。方法1.建立小鼠H22腹水型肝癌模型,抽取腹水细胞提总RNA,做逆转录,PCR扩增并进行琼脂糖凝胶电泳,检测腹水型H22肿瘤细胞中是否存在糖皮质激素受体。2.建立小鼠H22腹水型肝癌模型,选定地塞米松的最佳剂量。3.建立小鼠H22腹水型肝癌模型,检测地塞米松对腹水瘤的影响。4.建立小鼠H22腹水型肝癌模型,进行地塞米松不同用药天数的效果比较。5.建立小鼠H22腹水型肝癌模型,抽取两组小鼠腹水细胞提总RNA,做逆转录并进行Realtime-PCR,检测使用DEX后,H22腹水细胞中的GCR是上调,还是下调。6.建立小鼠H22腹水型肝癌模型,进行5-FU和地塞米松的效果比较。7.流式细胞仪检测DEX与对照组小鼠腹水细胞凋亡情况及细胞周期分布。8.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型,提取瘤块总RNA,做逆转录,PCR扩增并进行琼脂糖凝胶电泳,检测皮下移植型瘤块中是否存在糖皮质激素受体。9.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型,观察地塞米松和5-FU对移植瘤抑瘤率的影响。10.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型,提取瘤块总RNA,做逆转录并进行Realtime-PCR,检测使用DEX后,皮下移植型瘤块中的GCR是上调,还是下调。结果1.小鼠H22腹水型肝癌的腹水细胞中存在糖皮质激素受体。2.10 mg/kg剂量组小鼠的生存期比5 mg/kg、1 mg/kg、0.5 mg/kg剂量组小鼠的生存期长,腹水量比5 mg/kg及0.5 mg/kg剂量组小鼠的腹水量少。3.地塞米松组小鼠的生存期比生理盐水组小鼠的长,且腹水量少。4.从第5、6天开始给药比从第7、8天开始给药的生存期长,腹水量少。5.使用地塞米松后,H22腹水细胞中糖皮质激素受体的表达降低。6.H22腹水型肝癌,地塞米松组和生理盐水组小鼠的生存期比5-FU组和5-FU+DEX组小鼠的生存期长,但是腹水量多。7.使用地塞米松后,细胞凋亡比例减少,处于分裂周期的细胞比例下降。8.小鼠H22皮下移植型肝癌的瘤块中存在糖皮质激素受体。9.H22皮下移植型肝癌,地塞米松组和生理盐水组小鼠的生存期均比5-FU组和5-FU+DEX组小鼠的生存期长,但是瘤块大。10.使用地塞米松后,H22移植瘤块中糖皮质激素受体的表达降低。结论1.小鼠H22腹水型及移植型肝癌模型的建立非常成功。2.地塞米松可以抑制H22腹水细胞凋亡,使处于静止期的细胞比例增多,处于分裂增殖期的细胞比例减少。并且,可以下调H22肿瘤细胞中糖皮质激素受体的表达。3.地塞米松对小鼠H22肝癌腹水型肿瘤的生存期有明显的延长作用,且早期用药较晚期用药效果好。与盐水组小鼠肿瘤相比,地塞米松组腹水量少,生存状态较好。然而,化疗药虽然可以有效抑制肿瘤的生长,但对H22腹水型肝癌小鼠的生存期无作用,甚至会使其生存期缩短。4.化疗药对小鼠H22肝癌皮下移植瘤有明显的抑制作用,但也会致使小鼠死亡。地塞米松对小鼠H22肝癌移植瘤虽然无明显的抑制作用,但小鼠生存状态良好,不会致使小鼠死亡。