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目的:食少、腹胀是脾气虚所致胃失通降的主要表现,其发生机制尚不十分清楚。线粒体是平滑肌收缩的动力工厂,而脾气虚可致胃相关细胞线粒体损伤,因此提出胃平滑肌线粒体损伤与脾气虚胃失通降的发生有关。本研究从胃排空入手,围绕胃平滑肌细胞线粒体的形态和功能及线粒体未折叠蛋白反应等,探讨脾气虚胃失通降的发生机制。材料与方法:1.动物分组16只SPF级SD雄性大鼠,按照随机数字表法分成正常组和脾气虚证模型组(模型组),每组8只。2.脾气虚证模型的复制及评价2.1复制在15日内,模型组的大鼠饱食1日后,再禁食2日,不禁水,共计5个循环;每日在35～37℃的水温下游泳直至力竭。2.2评价(1)消瘦:电子秤测空腹体质量,下降明显;(2)食少:代谢笼计量单只大鼠24h的进食量以及饮水量,均明显减少;(3)神疲:检测大鼠5min内在旷场实验中运动的距离及站立的次数,显著下降;(4)乏力:抓力明显减小;(5)毛色枯槁:毛色无光泽,三人分别判断,结论一致。模型组大鼠满足上述条件则视为造模成功。3.胃残留率评价采用炭末推进法,测定大鼠胃内炭末含量,计算炭末在胃内的残留率,以评价胃排空情况。4.取材在各组大鼠空腹12h以后,腹腔注射10%水合氯醛(0.35ml/100g体质量)进行麻醉,大鼠断头处死,在冰上取胃,去除胃黏膜层和幽门部,保留胃窦部肌层组织,切取1mm×1mm×1mm小块置于2.5%戊二醛固定,其余胃平滑肌组织-80℃冻存备用。5.胃窦平滑肌线粒体超微结构观察取置于2.5%戊二醛中固定的1mm×1mm×1mm组织,PBS漂洗,1%锇酸固定,乙醇、丙酮梯度脱水,环氧树脂包埋聚合,切片,3%醋酸铀-枸橼酸铅双染,透射电镜下观察胃平滑肌线粒体超微结构变化。6.胃窦平滑肌线粒体功能评价取-80℃冻存备用的胃平滑肌组织,严格按照试剂盒说明书提取线粒体及制备组织匀浆,取上清液用于后续测定,采用JC-1法检测线粒体膜电位,比色法检测ATP含量和过氧化氢水平。7.胃窦平滑肌总抗氧化能力评价取-80℃冻存备用的胃平滑肌组织,严格按照试剂盒说明书制备组织匀浆,采用比色法检测总抗氧化能力。8.胃窦平滑肌未折叠蛋白反应相关蛋白表达取-80℃冻存备用的胃窦部平滑肌组织,提取总蛋白,采用Western blot法,检测热休克蛋白70(hot shock protein 70,Hsp70)、Lon蛋白酶(Lon protease,Lon P)及酪蛋白裂解酶(caseinolytic protease,Clp)XP复合物(包括Clp X和Clp P)等表达。9.数据处理采用SPSS17.0统计软件,数据以均数±标准差(＿X±S)表示,采用t检验,P<0.05视为具有统计学意义。结果:1.模型评价与正常组比较,模型组大鼠的体质量、进食量、饮水量、运动距离、站立次数、双前肢的抓力均明显下降且被毛蓬起枯槁无光泽,易脱落,模型复制成功。2.胃残留率正常组与模型组大鼠的胃残留率分别为37.1±7.51%和52.4±4.56%(n=8,P<0.01)。3.胃窦平滑肌线粒体形态二组线粒体均数量较多,但正常组线粒体内部致密,而模型组线粒体数量减少,部分线粒体出现空泡化。4.胃窦平滑肌线粒体功能正常组与模型组胃平滑肌线粒体膜电位分别为2±0.39 A.U.和1.53±0.19 A.U.(n=8,P<0.05),ATP含量分别为0.3±0.06 mmol/g和0.2±0.05 mmol/g(n=8,P<0.05),过氧化氢水平分别为100±0%和129.58±31.91%(n=8,P<0.05)。5.胃窦平滑肌总抗氧化能力正常组与模型组胃平滑肌总抗氧化能力分别为0.021±0.004mmol/g和0.019±0.006mmol/g(n=8,P>0.05)。6.胃窦平滑肌未折叠蛋白反应相关蛋白表达相对于正常组,模型组Hsp70的表达为98.38±0.07%(n=4,P>0.05),Lon P表达为476.08±48.53%(n=4,P<0.01),Clp X表达为236.3±45.37%(n=4,P<0.01),Clp P的表达为173.49±69.9%(n=4,P<0.01)。结论:1.脾气虚胃失通降与胃窦部平滑肌未折叠蛋白反应异常所导致的线粒体结构与功能损伤有关。