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1目的本研究首先评价及分析中医疏肝健脾活血法联合西医治疗肝癌的疗效。主要结局指标疗效评价包括:治疗后近期有效率,KPS评分的变化率,免疫细胞的功能。在此循证医学基础上,研究鳖龙软肝汤含药血浆对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞增殖的影响,为中医药治疗肝癌之“循证医学研究-基础实验探索-临床运用指导”提供一种新的思路,为中医药在临床运用的疗效提供确切的依据。2方法2.1中医疏肝健脾活血法联合西医治疗肝癌的疗效Meta分析采用Cochrane系统评价方法,数据库CNKI、维普检索符合条件文献,检索有关疏肝健脾活血法联合西医治疗原发性肝癌的临床研究,年限为1990-2016年,纳入符合条件的文献。采用统计软件RevMan5.3,对治疗后近期疗效、患者的生活质量(KPS评分)、以及细胞的免疫功能(T细胞亚型和NK细胞)进行统计学Meta分析。2.2鳖龙软肝汤对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞增殖的影响2.2.1鳖龙软肝汤含药血浆的制备SPF动物随机分为空白血浆组、鳖龙软肝汤小剂量组和鳖龙软肝汤中剂量组,大鼠灌胃量按体表面积换算法换算,小剂量相当于成人临床用量的6.562倍,中剂量相当于小剂量的5倍,空白血浆组用等量生理盐水灌胃,每日两次,连续灌胃5天,于末次给药2h后,腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.35ml/100g)下腹主动脉采血,常温下3000r/min离心15min后取血浆,0.22um滤膜过滤除菌,将各组血浆混合,分装至1.5mlEP无菌管中,至于-20℃冰箱保存备用。2.2.2外周血DCs的培养及鉴定无菌条件下取健康者外周血20ml,肝素钠(50U/ml)抗凝,PBS 1:1稀释,淋巴细胞分离液分离外周单个核细胞PBMCs,PBS洗涤2次,DMEM洗涤1次。用10%的FCS DMEM液调整PBMCs的浓度为2×10~6/ml,移入6孔培养板,每孔2.5ml,37℃5%CO2培养箱孵育过夜,吸弃培养上清液,37℃预热的DMEM液轻轻洗涤培养板2次,去除非贴壁细胞,获得贴壁单核细胞。分别加入粒-巨噬细胞击落刺激因子(GM-CSF)1000U/ml,IL-4 500U/ml完全培养基,隔日半量换液和加细胞因子,培养的第5天和第7天添加肿瘤坏死因子-α(TNF-α)20ng/ml,收集第9天悬浮的细胞即为成熟的DCs,进行电镜形态学鉴定。2.2.3 DCs增殖的检测取HBV相关性肝癌患者10例,各抽取手臂静脉血20ml,分离培养DCs,收集培养第5天的DCs,用鳖龙软肝汤含药血浆干预24h、48h、72h,通过CCK-8试剂,检测细胞的增殖。3结果3.1 Meta分析结果:疏肝健脾活血法联合西医治疗与单纯西医治疗相比,试验组的近期疗效率、生活质量KPS评分以及细胞的免疫功能明显优于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。3.2鳖龙软肝汤含药血浆对HBV相关性肝癌患者外周血树突状细胞的增殖有促进作用,且呈时间和浓度依赖性:24h低剂量组5%、10%、20%,48h低剂量组5%、10%、20%,72h低剂量组20%的含药血浆与相对应空白血浆组比较有显著差异(P<0.01),其中48h低剂量20%含药血浆组对树突状细胞的增殖最明显(P<0.01)。4结论4.1通过Meta分析论证中医疏肝健脾活血法联合西医治疗肝癌与单纯西医治疗相比,可明显提高治疗后近期疗效,改善患者生活质量,增强细胞的免疫功能。4.2与健康者相比,HBV相关性肝癌患者外周血DCs数量明显减少,免疫功能障碍。4.3鳖龙软肝汤含药血浆可刺激HBV相关性肝癌患者外周血DCs的增殖,且低剂量20%含药血浆、干预48h最佳。4.4鳖龙软肝汤为疏肝健脾法,临床循证医学及基础实验初步证明,此方在提高肝癌患者生活质量、免疫功能有确切疗效,值得推广运用。