【摘 要】
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目的:研究病毒载体介导的外酶C3转移酶基因治疗对大鼠和小鼠的降眼压作用,为其临床应用提供安全性及有效性实验依据。方法:购买雄性C57BL/6小鼠40只。使用自身互补双链腺相关病毒2型（self-complementary adeno-associated viral vector type 2,scAAV2）为载体并可分别表达C3和增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluoresce
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目的:研究病毒载体介导的外酶C3转移酶基因治疗对大鼠和小鼠的降眼压作用,为其临床应用提供安全性及有效性实验依据。方法:购买雄性C57BL/6小鼠40只。使用自身互补双链腺相关病毒2型（self-complementary adeno-associated viral vector type 2,scAAV2）为载体并可分别表达C3和增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的病毒（scAAV2-C3和scAAV2-EGFP）,对正常眼压的30只C57BL/6小鼠进行前房注射,其中15只小鼠注射scAAV2-C3(单眼剂量:5×1011vg,1μl),另外15只注射scAAV2-EGFP(单眼剂量:1×1012 vg,0.5μl),10只正常眼压的小鼠作为空白对照。记录第7天的眼压,使用MicronⅣ型视网膜成像仪观察房角增强绿色荧光蛋白的表达。购买雄性SD大鼠16只,使用慢病毒（lentivirus,LV）为载体并可分别表达C3和增强绿色荧光蛋白基因的病毒（LV-C3-EGFP和LV-EGFP）,对正常眼压的16只大鼠进行前房注射,左眼注射LV-C3-EGFP（单眼剂量:8×108 TU,5μl）,右眼注射LV-EGFP（单眼剂量:5×108 TU,8μl）,左右眼进行对照。分别记录第0天、第7天、第21天、第35天的眼压。实验过程中使用裂隙灯生物显微镜观察大鼠前房有无炎症。使用MicronⅣ型视网膜成像仪观察房角增强绿色荧光蛋白的表达。结果:1.整个实验过程中前房注射了scAAV2-C3和scAAV2-EGFP的小鼠,以及前房注射LV-C3-EGFP和LV-EGFP的大鼠均未引起明显的前房炎症。2.LV和scAAV2可携带目的基因转染到眼前房角上稳定表达一段时间,LV载体的大鼠房角荧光在第7天出现,第21天最亮,至少持续到第35天。通过对实验小鼠的眼压测量发现scAAV2-C3组相比scAAV2-EGFP组和空白对照组明显降低。4.通过对实验大鼠的眼压测量发现LV-C3-EGFP组相比LV-EGFP组明显降低。结论:以上结果表明,scAAV2-EGFP和scAAV2-C3的前房注射,LV-C3-EGFP和LV-EGFP的前房注射未引发明显前房和眼内炎症,对其生长活动影响较小。scAAV2和LV介导的外酶C3转移酶基因治疗能够降低大鼠和小鼠眼压并且病毒载体介导的外酶C3转移酶和增强绿色荧光蛋白能够在眼前节稳定表达一段时间,利用病毒载体将C3基因转染到小梁网组织中表达后降眼压,作为青光眼的基因治疗方法存在一定的潜力。
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