小鼠父系遗传背景对孤雌胚胎干细胞特性的影响

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遗传背景影响动物的胚胎发育和出生后动物发育状态。动物卵母细胞孤雌激活后在体外培养可发育为囊胚,囊胚在ES细胞培养条件下生长、传代可分离孤雌胚胎干细胞(parthenogenetic embryonic stem cells, pESCs)。遗传背景影响孤雌胚胎发育和pESCs的分离效率。已有研究表明遗传背景可影响小鼠pESCs的获得效率,但父系遗传背景能否影响pESCs多能性和线粒体基因表达等特性还未知,本文立足于父系遗传背景这一因素,通过对pESCs多能性和线粒体基因表达的检测,探讨其对pESCs特性的影响,同时作为后续深入研究的参照数据。(1)本实验以父系(129/Sv、C3H)和母系(KM)小鼠来源的pESCs (KM×129/Sv FI和KM×C3H FI)为研究对象,J1 ESCs为对照,通过从形态学观察,PCR、qPCR测定多能性相关标志基因表达情况,免疫荧光检测干细胞标志蛋白的表达,细胞体外拟胚体形成及分化能力,检测实验组和对照组细胞特性的差异。结果显示:Ji ESCs和两株pESCs均保持全能性,但某些多能性基因的表达水平有显著差异:Oct-4在KM×C3HFI pESCs中表达水平显著高于J1ESCs (p<0.05),而Sox2、H19、IGF2、KIF4、C-myc表达水平极显著高于J1ESCs (p<0.01); 在KM×129/SvFIpESCS中, Sox2、Nanog的表达水平显著高于J1ESCs(p<0.05),C-myc表达水平极显著高于J1ESCs(p<0.01);另夕KM~C3HF1 pESCs形成的EBs直径显著小于J1ESCs(p<0.05), KM×129/Sv FI pESCs形成的EBs直径极显著小于J1ESCs(p<0.01)。综上所述,来源于129和C3H父系遗传背景的pESCs多能性标志基因的表达水平明显高于J1ESC,证明父系遗传背景影响pESCs多能性基因的表达。(2)检测两株pESCs以及J1ESCs增殖能力,并通过qPCR检测线粒体基因Pnpt1、 Cox2、tim23、tom40、12sRNA和CytoC的表达情况。结果显示:第2-5天KM×129/Sv FI pESCs增值速度显著低于J1ESCs (p<0.05),但在第6天细胞增殖速度显著加快(p<0.05);第1、3、6天KM×C3H FI pESCs增殖能力显著低于J1ESCs (p<0.05),在第4天和第5天差异极显著(p<0.01); tim23在KM×C3H FI pESCs中表达水平显著低于J1ESCS (p<0.05):Tom40 在KM×129/Sv FI pESCs中表达水平显著高于JiESCs(p<0.05)。 CytoC表达水平极显著低于J1 ESCs (p<0.01),12sRNA表达水平极显著高于J1 ESCs(p<0.01)。结果证明父系遗传背景影响pESCs细胞活力和线粒体基因表达。
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