【摘 要】
：
目的:探讨葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基（Glucose-6-phsophatase,catalytic subunit,G6PC）对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其可能的分子机制,为宫颈癌的临床靶向治疗提供新的方向和理论基础。方法:通过Human Protein Atlas（HPA）数据检索G6PC蛋白在宫颈癌组织中的表达;蛋白免疫印迹实验检测正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞系中G6PC蛋白
论文部分内容阅读
目的:探讨葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基（Glucose-6-phsophatase,catalytic subunit,G6PC）对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其可能的分子机制,为宫颈癌的临床靶向治疗提供新的方向和理论基础。方法:通过Human Protein Atlas（HPA）数据检索G6PC蛋白在宫颈癌组织中的表达;蛋白免疫印迹实验检测正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞系中G6PC蛋白的表达;通过RNA干扰技术（RNAi）敲低G6PC表达较高宫颈癌Hela细胞中G6PC基因的表达,蛋白免疫印迹实验验证敲低效果;噻唑蓝实验即MTT法检测敲低G6PC基因（24h、48h、72h）对宫颈癌Hela细胞增殖能力的影响;应用平板克隆实验检测敲低G6PC基因的宫颈癌Hela细胞的集落形成能力;划痕愈合实验检测敲低G6PC基因对宫颈癌Hela细胞横向迁移能力的影响;Transwell小室实验检测敲低G6PC基因对宫颈癌Hela细胞纵向迁移和侵袭能力的影响;通过微血管形成实验检测敲低G6PC基因后,人脐静脉血管内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的血管形成能力;Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡形态学改变,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡率;蛋白免疫印迹实检测血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、上皮-间质转化途径（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白、凋亡相关蛋白以及蛋白酶激B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Protein kinase B/Mammalian target of rapamycin,Akt/m TOR）信号通路等相关蛋白的表达水平。结果:1.G6PC蛋白在宫颈癌组织和细胞系中高表达:HPA数据检索发现,G6PC蛋白在宫颈癌组织中呈不同程度的高表达,蛋白免疫印迹实验结果显示,G6PC蛋白在正常宫颈上皮细胞中的表达显著低于在宫颈癌细胞系中的表达,并且在宫颈癌Hela细胞中表达较高,因此选择Hela细胞进行后续敲低实验;2.敲低G6PC基因抑制宫颈癌Hela细胞的增殖并诱导其凋亡:MTT检测结果显示,与对照组相比敲低G6PC基因显著抑制了宫颈癌Hela细胞的增殖能力（P<0.05）;平板克隆实验结果显示,与对照组相比敲低G6PC基因后,宫颈癌Hela细胞的集落形成能力明显降低（P<0.01）;Hoechst 33342荧光染色法观察细胞形态,结果显示敲低G6PC基因的宫颈癌Hela细胞出现核固缩、碎裂等明显凋亡表现,Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,与对照组相比,敲低G6PC的Hela细胞的凋亡率增加,蛋白免疫印迹实验也表明Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9表达均上调（P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则下调（P<0.05）,Bax/Bcl-2的比值升高（P<0.01）,PARP的表达下调（P<0.05）;3.敲低G6PC基因抑制宫颈癌Hela细胞迁移、侵袭、血管生成能力和EMT进程:划痕愈合实验以及Transwell实验结果表明,敲低G6PC基因抑制了宫颈癌Hela细胞的横向、纵向迁移能力和侵袭能力（P<0.05）;微血管形成实验结果显示,与对照组相比,G6PC敲低处理后宫颈癌Hela细胞上清液培养的人脐静脉内皮细胞的血管形成能力明显降低（P<0.01）;蛋白免疫印迹实验结果显示,敲低G6PC基因使VEGF表达下调（P<0.05）,EMT相关蛋白上皮标志物E-cadherin表达水平上调（P<0.05）,而间质标志物Vimentin和转录因子Snail表达下调（P值均<0.05）;4.敲低G6PC基因抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路:蛋白免疫印迹实验检测AKT/m TOR信号通路等相关蛋白的表达水平,结果显示p-m TOR、p-AKT表达水平显著降低（P<0.05）。结论:1.敲低G6PC基因能够抑制宫颈癌Hela细胞的增殖并诱导其凋亡。2.敲低G6PC基因通过逆转EMT,抑制血管形成进而抑制Hela细胞侵袭和转移。3.敲低G6PC基因对宫颈癌Hela细胞表型的影响可能与抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路有关。
其他文献
目的:分析术前炎症指标单核细胞、淋巴细胞的比值（monocyte/lymphocyte ratio,MLR）、血小板计数和单核细胞的乘积与淋巴细胞的比值（neutrophil*monocyte/lymphocyte ratio,SIRI）、血小板计数（blood platelet count,PLT）、纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）、清蛋白和球蛋白比值（albunmin/globuli
背景:研究表明,在乙型肝炎病毒中的乙型肝炎病毒X蛋白（Hepatitis B X Protein,HBx）、细胞色素P450家族2亚家族E成员1（Cytochrome P450 2E1,CYP2E1）以及β-连接蛋白（β-catenin）在人类肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中均具有相关关系,但根据组织分化程度的不同,HBx、CYP2E1及β-catenin的表
目的:对鼓室内注射（Intratympanic Injection,Ⅱ）和耳后注射（Postauricular Injection,PI）糖皮质激素作为初始治疗与补救治疗对于突发性聋（Sudden Sensorineural Hearing Loss,SSNHL）的有效性及安全性进行Meta分析。方法:通过关键词在中国知网、万方、维普、PubMed、Cochrane等数据库检索2005～2020年
目的:Ebp1是Erb B3受体的主要结合蛋白之一,具有多种细胞功能包括凋亡、增殖和分化。研究表明Ebp1不同类型的癌症中表达,并在癌症的发展中起重要作用,Ebp1在胃癌细胞中也高表达,但其在胃癌中的确切作用仍不清楚。本研究探讨沉默Ebp1蛋白对胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭和迁移的影响、为胃癌的诊断和预后提供实验依据。方法:本实验利用胃癌HGC-27细胞株,用重组慢病毒载体感染72小时观察细胞中
目的:对使用TADA方案（亚砷酸、沙利度胺、地塞米松、维生素C）与其他常规化疗方案治疗多发性骨髓瘤进行比较,探讨亚砷酸治疗骨髓瘤的疗效,为临床研究和选择治疗方案时提供参考。方法:回顾性分析2005年～2018年间就诊于延边大学附属医院血液内科的多发性骨髓瘤患者40例,根据患者使用的化疗方案分为两组,使用TADA方案化疗组20例,其他常规化疗方案组20例,收集两组患基线资料:性别、年龄、ECOG评分
癌症即将成为21世纪的首要死亡原因,根据2020年最新癌症数据表明:肺癌、前列腺癌、结直肠癌和乳腺癌,排名癌症的前四位。其中肺癌根据病理学可以比较细化地分为小细胞肺癌（Small Cell Lung Cancerd,SCLC）和非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）。小细胞肺癌属于高度恶性肿瘤,最主要治疗方法分别是采用手术和放化疗,但是手术治疗只局限于早期
研究背景:胃癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率较高,预后较差,因此寻求高效、低毒、多靶点、副作用小的抗胃癌药物具有重要的临床意义。类叶牡丹（Caulophyllum robustum Maxim）又称红毛七,为小檗科红毛七属植物,根状茎粗短可药用,它主要含有生物碱、三萜皂苷、黄酮、甾醇等成分,具有抗肿瘤、祛风通络、活血调经、止痛、抑菌抗炎等效用。主要用于类风湿性关节炎、胃痛、高血压
目的:肺癌是全世界最常见的癌症死亡原因。其中,非小细胞肺癌是更为常见的组织学类型,具有较高的发病率和死亡率。所以针对非小细胞肺癌的治疗研究是重中之重。本课题采用聚乙二醇化多西他赛白蛋白纳米粒并结合超声波照射治疗裸鼠非小细胞肺癌模型,并以肺癌A549细胞为主要研究对象,进行一系列体内及体外实验,观察治疗效果,希望为临床治疗非小细胞肺癌提供一种新思路。方法:1.将人非小细胞肺癌A549细胞系进行体外细
目的:探讨术前和术后中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）及术前联合术后中性粒细胞/淋巴细胞比值（PP-NLR）在原发性肝癌微波消融（Microwave ablation,MWA）治疗后复发的预测价值,为今后指导原发性肝癌的临床治疗提供参考依据。方法:回顾性分析2016年1月至2020年9月在延边大学附属医院医院确诊为原发性肝癌（PLC）并接受微波消融（MWA）治疗的78例患者临床资料,其中男性55例
目的:研究重症缺血性脑卒中患者入院24小时内所采集的血化验结果及评分量表与发生急性胃肠损伤（AGI）的相关性,并探讨其对急性胃肠损伤发生的预测价值。方法:收集自2017年9月-2020年9月于延边大学附属医院神经内科重症监护病房住院治疗的207例重症缺血性脑卒中患者,记录入院时的NIHSS评分及GCS评分,收集入院24小时内的中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、白蛋白和hs-CRP的结果,计算出NLR,