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正红菇(Russula griseocarnosa)是一种外生菌根菌,属菌物界,担子菌门,伞菌纲,红菇目,红菇科。又名大红菇、大朱菇、大红蕈、大红菌、红菇、真红菇、胭脂菇、红椎菌等。正红菇含有丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素、氨基酸等,具有极高的营养价值,并具有降血脂降血压、抗氧化等生物活性。但目前对正红菇多糖的分离纯化、结构鉴定及其生物活性的系统研究较少,本课题将系统展开对正红菇子实体多糖的提取、分离、纯化及其结构鉴定、生物活性等方面的研究。主要研究结果如下:正红菇子实体中总糖、粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、灰分、水分含量分别为:41.59%,23.31%,5.24%,1.75%,8.43%,11.78%。其中Mg、Fe、Zn、Mn、Ca等矿质元素的含量分别为770.2,760.85,85.29,11.53,328.75mg/kg。以多糖得率为指标,考察热水浸提法提取正红菇多糖的工艺,单因素实验结合正交实验得出正红菇最佳提取工艺为提取温度100℃,提取次数3次,提取时间3h,液料比30倍,在此条件下正红菇子实体多糖提取得率为12.13%。最佳工艺提取的正红菇糖液,经树脂脱色、Sevag脱蛋白、乙醇醇沉、浓缩、烘干等步骤,得到正红菇子实体粗多糖HAP,其得率为2.0%,呈淡黄色。粗多糖经DEAE-52柱层析分离,超滤离心辅助分离纯化透析处理后得到一种均一多糖HAP-I和一种混合多糖HAP-II。HAP-I经Sephadex G-100柱层析洗脱后曲线为单一对称峰,GPC图谱出峰分布均一,峰形对称,表明HAP-I是均一多糖,重均分子量Mw为16861,而HAP-II为混合多糖。对正红菇多糖HAP-I、HAP-II进行了理化性质分析,HAP-Ⅰ为棉絮状白色固体,总糖含量为79.80%,不含有可溶性淀粉,糖醛酸含量为14.30%,不含蛋白质;HAP-II为棉絮状淡黄色固体,总糖含量为82.39%,不含有可溶性淀粉,糖醛酸含量为10.01%,不含蛋白质。正红菇多糖HAP-I结构分析:GC测定单糖组成分析结果显示,HAP-I由D-鼠李糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成,4种单糖摩尔比为1:8.29:7.45:18.13;红外光谱分析结果表明,HAP-I在3401cm-1、2930 cm-1、1641 cm-1处的吸收峰均是多糖的特征吸收峰,多糖结构中含有β-D-吡喃葡萄糖环和甘露糖;高碘酸氧化结果分析得出正红菇多糖HAP-I中含有1→6、1→3、1→2和1→4糖苷键,Smith降解进一步分析证明HAP-I的降解物中不含有赤藓醇、乙二醇,但含有大量的甘油,表明糖链中不含1→4糖苷键而含有1→2糖苷键;NMR的分析图谱表明HAP-I是以(1→6)糖苷键为主链构成的多糖,主要是由两种单糖组成的杂多糖,同时存在α、β两种糖苷构型,是含有半乳糖基的吡喃糖。抗氧化活性研究采用正红菇多糖HAP-I对DPPH·、·OH和O2-·等自由基的清除能力及还原能力测定,结果表明,HAP-I具有良好的自由基清除能力,且自由基清除作用大小依次是DPPH·>·OH>O2-·。选用人宫颈鳞癌细胞Si Ha、昆明小鼠脾脏细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7对正红菇多糖免疫活性和抗癌作用进行了研究,得出正红菇多糖HAP、HAP-I、HAP-II对癌细胞Si Ha均有显著的抑制作用,呈一定的剂量依赖性,其中均一多糖HAP-I抑制效果最佳,其次为酸性多糖HAP-II;癌细胞划痕实验,直观的显示了均一多糖HAP-I对癌细胞增殖的抑制作用。正红菇多糖HAP、HAP-I、HAP-II能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力,能促进巨噬细胞分泌NO和细胞因子IL-6,均一多糖HAP-I表现出的免疫作用最强;同时,正红菇多糖均能协同LPS和Con A促进淋巴细胞的增殖,三种多糖作用效果无统计学差异。