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酸性磷酸酶Acid phosphatase简称ACP)，是一类在酸性条件下水解底物中的磷酸单酯的诱导酶，在生物磷代谢中起着重要作用。ACP不仅与生物的生长调节、代谢调节及信号转导等方面的生理机能关系密切，亦能增强植物对缺磷、干旱、低温等逆境的抗性，因此近年引起学者的广泛重视。
绿豆(Vigna radiata，Mung bean)属于豆科蝶形花亚科豇豆属的一年生草本植物。原产印度及尼罗河流域。它是一种集营养保健、食品饲料，抗菌消炎于一体纯天然绿色作物。绿豆营养丰富，蛋白质的含量是粳米的3倍，且含多种维生素、钙、磷、铁等无机盐，具有很高食用价值；绿豆味甘性寒，具清热解毒，消肿、散翳明目的作用，其绿豆衣提取液还具有明显的抗菌抑菌作用，因此在医学界引起高度重视。近年来，对绿豆的研究越来越多，其中冀绿豆2号由于它比较耐旱、耐瘠、抗病性能好，对环境胁迫适应性很强，这正好符合诱导产生酸性磷酸酶的主要条件。同时，在豆类植物中，冀绿豆2号的蛋白质含量相对要少，这样分离纯化效果会更好。目前对绿豆酸性磷酸酶的分离纯化未见报道。因此本文以冀绿豆2号绿豆芽为原料，对酸性磷酸酶的分离纯化、理化性质、酶促动力学特性、抑制剂以及功能基团的化学修饰等方面进行了研究，以期为进一步研究ACP提供理论参考及耕作改进、对作物遗传改良提供有益帮助。研究结果如下：
1.绿豆酸性磷酸酶的分离纯化
采用硫酸铵分部沉淀，DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdgx-200凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化，采用SDS-PAGE鉴定酶的纯度，获得电泳纯的ACP，纯化倍数为156.3，酶活力回收率为4.0％，比活达347.0U/mg。
2.绿豆酸性磷酸酶的性质研究
凝胶过滤法测定酶相对分子质量为34.6 kD，SDS-PAGE测定酶的亚基相对分子质量为33.1 kD。推测绿豆酸性磷酸酶为单亚基酶。该酶最适温度为40℃，最适pH值为5.2，以pNPP为底物测定该酶的表观Km为4.28×10-3mol/L。
3.金属离子及化学试剂的影响
Mg2+、Co2+对酶有激活作用，而Hg2+，Ca2+，Pb2+和Zn2+对该酶有明显的抑制作用，依次为：Hg2+>Cu2+>Pb2+>Zn2+。K+，Ca2+对酶影响不明显。有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对该酶有明显抑制作用。化学试剂抗坏血酸对该酶有明显抑制作用；尿素和EDTA对其基本无影响；过氧化氢对其有双重影响，低浓度时有激活作用，超过50mmol/L激活作用消失。
4.绿豆酸性磷酸酶的功能基团修饰
蛋白修饰剂：氯胺T、对氯汞苯甲酸(PCMB)、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、苯甲基磺酰氟(PMSF)对该酶抑制作用显著，低浓度的情况下即可使酶活力完全丧失，据此，初步判定甲硫氨酸残基、色氨酸残基、丝氨酸残基是绿豆酸性磷酸酶的活性中心的必需基团；琥珀酸酐(SUAN)、二琉基苏糖醇(DTT)、溴乙酸(BrAc)及乙酰丙酮(BD)对酶的影响不显著，推测组氨酸残基、精氨酸残基、赖氨酸残基和二硫键对维持该酶活性贡献不大。