论文部分内容阅读
白僵菌(Beauveria)是自然界常见的虫生真菌之一，对家蚕的危害十分严重。特别是近年来家蚕白僵病的流行十分严重，给广西等地主要蚕区造成了严重的经济损失，因此开展有关家蚕白僵病的病原溯源工作，显得尤为重要。为了探明广西和广州收集到的家蚕来源白僵菌和生物防治用的白僵菌之间的关系，用PDA培养基对9株来自僵蚕的家蚕白僵菌：实验室保留株Bb1、广西中平山届株Bb3、浪洞村株Bb4、茂名株Bb5、化州株Bb6、化州蚕种场株Bb8、象州株Bb9、宜州株Bb11、环江株Bb12，及3株来自生物防治用的白僵菌菌株广州株Bb2、林学院株Bb7、广西株Bb10进行了初步的培养和分离鉴定。首先，通过对上述12株白僵菌进行外部形态及内部结构的观察和初步鉴定；其次，测定了各菌株对家蚕的毒力；最后，用特异的引物再次对白僵菌线粒体基因组中的靶基因进行了分子生物学的鉴别和系统发育分析，为生产上进行家蚕白僵病的溯源和系统控制、及安全使用真菌生物农药等研究提供了实验参考。本论文的研究结果主要有：
(1)12株白僵菌的生物学特性初步鉴别结果表明菌株Bb1、Bb3、Bb4、Bb5、Bb6、Bb7、Bb8、Bb11、Bb12可能属于球孢子白僵菌[Beauveria bassiana(Bals.)Vuill.]，Bb2、Bb9、Bb10可能属于卵孢白僵菌[Beauveria tenella(Delacr.)Siem]。
(2)12株白僵菌对家蚕毒力LC50比较发现广西宜州菌株Bb11对家蚕的毒力最强，为2.47×106个/mL。广州生物防治株Bb2和实验室保留菌株Bb1对家蚕的致病力最弱，分别为1.07×107个/mL和6.82×106个/mL。从毒力LC50的试验结果发现广西宜州菌株Bb11为高毒力菌株。
(3)对筛选出来的典型6株白僵菌通过扫描电镜观察表明，6株白僵菌的分生孢子着生形态不同，分生孢子的形态特征也不同，菌株Bb1、Bb7、Bb12的分生孢子大小相似，分生孢子呈球形，菌株Bb2、Bb9、Bb10的分生孢子为卵圆形。即白僵菌株Bb1、Bb7、Bb12可能属于球孢白僵菌，Bb2株、Bb9株、Bb10可能属于卵孢白僵菌。
透射电镜结果表明，6株白僵菌菌株中，自然感染菌株可以明显的看到分生孢子和菌丝的细胞内部结构，生物防治株很难观察到分生孢子和菌丝的细胞内部结构。
荧光染色观察12株白僵菌分生孢子结果表明，能清楚看见白僵菌的分生孢子。(4)通过对12株白僵菌进行线粒体基因PCR扩增鉴定发现，12株菌株都能扩增出条带。把扩增的条带经双向测序分析，发现林学院株Bb7无法获得序列，而其它11株均获得了约500 bp大小的片段。对获得的序列经过系统发育分析发现，它们分为4个分支，距离相近的菌株之间相似性较高。