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目的: 1、研究IGF-1对高氧诱导的A549细胞周期的影响。 2、研究IGF-1对A549细胞凋亡及Bax、Bcl-2及caspase-3表达的影响。 方法: l、A549细胞株传代培养。 2、分组:Ⅰ组:正常组,Ⅱ组:高氧组,Ⅲ组:高氧+IGF-1低剂量组,Ⅳ组:高氧+IGF-1中剂量组,Ⅴ组:高氧+IGF-1高剂量组等5组。 3、A549细胞高氧处理及药物干预:放入CO2恒温细胞培养箱内培养,倒置显微镜下观察各组细胞动态生长状况,待细胞融合至40-50%时,进行IGF-1药物干预。 (1)Ⅱ组(高氧组):细胞用含10%胎牛血清的1640培养液放入氧浓度85%的封闭箱内放入5%CO2、37℃细胞培养箱内培养48h; (2)药物干预组:将Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组细胞用不同剂量IGF-1处理,与高氧组一同放入氧浓度85%封闭箱内,再放入5%CO2、37℃细胞培养箱内培养48h; (3)Ⅰ组(正常组):细胞用含10%胎牛血清的1640培养液放入5%CO2、37℃培养箱内培养。 4、观察指标:①采用MTT法检测细胞存活率; ②采用流式细胞仪分析细胞周期; ③HE染色观察细胞的凋亡情况; ④采用流式细胞仪AnnexinⅤ-PI荧光双染法检测细胞的凋亡; ⑤免疫细胞化学的方法检测Caspase-3的表达变化。 ⑥采用流式细胞仪检测bax、bcl-2表达的水平。 5、统计学资料处理方法: 计量资料用均数士标准差(x士s)来表示,应用 SPSS17.0统计学软件进行统计学分析,各组数据资料服从近似正态分布,组间比较利用单因素方差分析。P<0.05表明有显著性的差异,具有统计学的意义。 结果: 1、细胞存活率测定:与Ⅰ组相比,Ⅱ组A549细胞的存活率明显降低,差异有显著性意义(P<0.05);与Ⅱ组相比,Ⅲ组OD值无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05);而Ⅳ、Ⅴ组OD值随着IGF-l药物浓度的递增逐渐增大,细胞存活率逐渐升高,与Ⅱ组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。 2、细胞周期分析:与Ⅰ组相比,Ⅱ组A549细胞S、G2-M期的细胞百分比下降,差异均有显著性意义(P0.05),但是S期细胞百分比在不同剂量IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性效应。 3、流式细胞仪检测细胞凋亡:利用AnnexinⅤ-PI双染法检测细胞凋亡,结果Ⅱ组凋亡率较Ⅰ组明显增多,差异有显著性意义(P
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