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目的:观察白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)在大鼠烟曲霉菌性角膜炎固有免疫阶段角膜上皮组织中的表达并分析其表达量变化的原因。
方法:健康Wistar大鼠72只,雌雄不限,在刮除中央区角膜上皮的大鼠角膜上涂以烟曲霉菌标准菌落并覆盖自制角膜接触镜,建立大鼠烟曲霉菌性角膜炎感染模型。大鼠随机分为2部分,用于免疫组织化学实验的A1、B1、C1组(每组各6只大鼠)和用于RT-PCR实验的A2、B2、C2(A2组6只、B2、C2组24只):A1、A2组为空白对照组,不予任何处理:B1、B2组为损伤对照组,建立模型,仅刮除中央区角膜上皮后覆盖角膜接触镜,不涂抹真菌;C1、C2组为真菌模型组,建立真菌模型。成功建模后4h打开眼睑,并于造模后第4h、8h、16h、24h处死大鼠,取角膜上皮组织。HE染色观察角膜组织病理变化并检测真菌生长,运用免疫组织化学和RT-PCR技术检测各组不同时间点IL-6与IL-10的表达情况。
结果：
1.组织病理学观察见真菌性角膜炎病灶内有炎症细胞浸润,HE染色检查在角膜基质层可见菌丝及孢子。
2.IL-6在空白对照眼角膜基本不表达或极微量表达;真菌实验组在接种真菌后4h开始出现IL-6的表达,并逐渐增高,在第24h表达量升高显著,各时间点比较差异具有显著性(P＜0.01)。
3.IL-10在空白对照组角膜基本不表达或极微量表达;真菌实验组在真菌刺激后4h开始出现IL-10的表达,并逐渐增高,在24h表达量升高显著,各时间点比较差异有显著性((P＜0.01)。
结论：1.10%氢氧化钾涂片及组织刮取物行菌落培养证实大鼠真菌性角膜炎动物模型建立成功。2.IL-6在烟曲霉菌性角膜炎角膜上皮组织中早期即开始表达,表达量逐渐增高,其表达量的增高与角膜炎症程度呈正相关,在大鼠烟曲霉菌性角膜炎病程中是一个敏感的炎症因子,能反映局部的炎症反应程度。3.IL-10表达于真菌性角膜炎角膜上皮组织中,烟衄霉菌菌丝刺激后表达升高,24h升高显著,提示IL-10可能参与了烟曲霉菌性角膜炎的发生与发展,作为一种保护性细胞因子通过抗炎抗免疫反应也参与了角膜组织修复和抗损伤过程。