富血小板血浆支架体内诱导牙髓再生的初步研究

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目的:分别探讨不同类型的富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)支架和复合牙髓细胞的PRP支架体内诱导牙髓再生的可行性;评价不同类型的PRP支架募集内源性细胞归巢的能力,为PRP支架应用于牙髓再生的临床治疗提供实验基础和理论依据。方法:1.实验一:改良的Curasn’s方法制备富白细胞富血小板血浆(leucocyte-rich plasma,L-PRP)支架,将小型猪乳牙牙根段进行化学预备,随机分为4组,每组6个样本,分别为①全血组;②100%L-PRP组;③50%L-PRP组:将100%L-PRP用DMEM培养基稀释成50%L-PRP(v/v)④空白组,空的牙根段。分组植入裸鼠背部皮下,5周后取出样本进行组织学观察。2.实验二:二次离心法制备贫白细胞富血小板血浆(leucocyte-poorplatelet-rich plasma,P-PRP)支架,组织块法分离培养人牙髓细胞(humandental plus cells, hDPCs)并进行鉴定。将人牙根管段进行机械化学预备,随机分为3组,每组8个样本,分别为①阴性对照组:P-PRP支架;②实验组:P-PRP支架复合hDPCs;③空白组,空的牙根段。分组植入裸鼠背部皮下,8周后取出样本进行组织学观察分析。结果:1.小型猪全血制备的100%L-PRP中血小板和白细胞的含量分别是全血的6倍和4倍。移植了100%L-PRP的两只裸鼠出现皮肤损害和炎症反应。2.50%L-PRP组根管内有新的结缔组织形成,没有血管生成;100%L-PRP组根管内充满了大量的炎性细胞,可见少量散在的梭形细胞。3.培养的第4代hDPCs矿化诱导后碱性磷酸酶染色呈阳性,茜素红,Von Kossa染色,可观察到少量钙结节生成。人全血制备的P-PRP中血小板的含量是全血的1.55倍,白细胞含量远远低于全血中的含量。单独移植P-PRP支架的根管内观察到不规则的组织形成。4.P-PRP支架复合hDPCs的根管内观察到有血管化的牙髓样组织形成,但是没有牙本质样组织生成。根管内大部分细胞抗人线粒体免疫组织化学染色阳性,表明新生组织中细胞主要是人来源的细胞,但在靠近根管开口附近有较集中的抗人线粒体免疫组织化学染色阴性的梭形细胞,表明有内源性宿主细胞参与组织再生。结论:1.复合hDPCs的P-PRP支架在体内再生牙髓样组织是可行的。2.单独移植L-PRP支架或者P-PRP支架可以募集内源性细胞参与组织再生,但是募集的细胞类型和数量有限。
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