水稻Pi-HIT-1基因RNA干扰载体的构建及转化

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rongsiyouyu
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为了建立RNAi(RNA interference)在水稻基因功能研究方面的应用技术,本文以pCAMBIA1301为载体,以Pi-HIT-1基因为干扰的靶基因,设计了一个不同序列长度的插入序列,和一个无关模拟序列为对照,构建了一个能起干扰抑制作用的RNAi载体和一个对照RNAi载体,并通过农杆菌的方法转化到水稻愈伤组织中,经潮霉素对水稻愈伤组织进行转入阳性筛选后,提取转入阳性的水稻愈伤组织的DNA分别用PCR、Southern blotting方法进行分析,鉴定目的基因片段的转化和整合的情况,结果表明pCAMBIA1301质粒成功转化与否,与水稻品种相关,台北309水稻是本实验中较容易转化的品种,整合到其愈伤组织的基因组的比率为75%。已成功转抑制载体的台北309植株有23株,对照载体有10株,空白pCAMBIA1301有5株,为进一步研究Pi-HIT-1基因的功能分析提供了条件。
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