论文部分内容阅读
前言：肝纤维化是各种致病因子导致肝细胞炎症、坏死,肝脏中胶原蛋白等细胞外基质(extracellular matrix, ECM)降解与沉积失衡,进而导致肝脏内结缔组织异常增生的可逆性伤口愈合反应。在肝纤维化发生发展的过程中,肝星状细胞激活后,分泌并促进过度的Ⅰ型胶原蛋白及其他细胞外基质沉积。新兴研究的Wnt/p-catenin通路,与肝星状细胞的激活、肝纤维化的发生发展也存在着一定的关系。肝纤维化的中医病因病机复杂多变,其病机关键是湿热留恋,以致湿浊瘀热互结,肝络受损。本课题组既往的研究发现,基于清热祛湿活血立法的加味茵芍散治疗慢性肝炎和肝纤维化有一定疗效,可缓解、逆转肝纤维化病人肝纤维化进展。因此制定清热祛湿活血的治法并探讨该治法抗肝纤维化机制可更好的为临床用药提供理论依据。目的：本实验旨在通过观察大鼠ALT、AST、透明质酸酶(HA)、IV胶原蛋白、Ⅲ型前胶原肽(PIIINP)、层粘连蛋白(LN)血清水平,肝组织病理变化情况,TGF-p、p-catenin mRNA和蛋白质的表达情况,进一步探讨清热祛湿活血法抗肝纤维化的分子机制,为中医药防治肝纤维化寻找新的作用靶点和途径。方法：成年雄性Wistar大鼠60只随机分组为给药组、造模组和正常组。造模给予四氯化碳皮下注射,辅以高脂饮食和30%酒精为唯一饮用水,共16周。第5周起给予中药和秋水仙碱每天灌胃干预,12周后处死。检测血清ALT、AST、HA、IV胶原蛋白、PIIINP、 LN, HE染色和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理变化情况。免疫组化检测各组大鼠肝组织TGF-β和β-catenin表达情况,RT-PCR和Western Blot检测TGF-β和β-catenin mRNA和蛋白质表达水平。结果：经过造模及灌胃干预后,中药组的大鼠肝功能情况及反映肝纤维化的四项血清指标较造模组明显好转；中药高剂量组与秋水仙碱组相比,血清ALT、AST、Ⅳ型胶原蛋白、HA、PIIINP值均明显下降。HE染色及Masson染色见正常组大鼠肝组织结构完整、细胞形态正常,肝细胞绕中央静脉成放射状,细胞周围有少量胶原纤维排列整齐；模型组大鼠肝组织正常结构破坏严重、细胞排列紊乱、伴随大量细胞空泡样变性,大量胶原包绕细胞,可见部分细胞内亦有绿色物质；中药高剂量组、中药中剂量组肝组织正常结构破坏程度较轻,部分细胞脂滴形成,胶原纤维形成,程度较造模组、秋水仙碱组轻。免疫组化结果见造模组TGF-β、β-catenin阳性表达高于给药组,秋水仙碱组TGF-β、 β-catenin阳性表达高于中药高剂量组。RT-PCR和Western Blot结果示给予加味茵芍散的大鼠肝脏组织内TGF-β、β-catenin在mRNA和蛋白质表达水平上均低于造模组大鼠和秋水仙碱组大鼠。结论：基于清热祛湿活血立法的加味茵芍散可缓解大鼠模型的肝纤维化,并且对受损的肝功能具有一定的保护作用。其抗肝纤维化分子机制可能与抑制或下调TGF-β、β-catenin mRNA和蛋白质的表达,从而阻断TGF-β、Wnt/β-catenin细胞通路的激活有关。