尤文氏肉瘤（ES）与外周神经外胚层肿瘤（PNET）同属于尤文肉瘤家族（ESFTs）,是以小而未分化的神经外胚层细胞为特征的恶性软组织肿瘤。在遗传学上,约85%的ES/PNET病例中存在11号和22号染色体之间的相互异位,即t（11;22）（q24;q12）相互异位。尤文氏肉瘤是在儿童和青壮年中发病率仅次于骨肉瘤第二常见的恶性肉瘤,约占儿童恶性肿瘤的3%,男女比例约为3:2,中位发病年龄为15岁,所有骨骼均可受到影响。目前,采用多种药物化疗、联合外科手术和放疗的现代多模式治疗方案可以使局限性肿瘤患者的治愈率达到70%左右。然而,尽管进行了这些联合治疗,侵袭性肿瘤患者的存活率仍然很低。靶向治疗尤文氏肉瘤有可能改善治疗效果。嵌合抗原受体修饰的T细胞（CAR-T）免疫疗法,作为一种新兴的靶向肿瘤疗法,显示出巨大的潜力。CAR-T细胞通过利用免疫系统的监视能力和靶向肿瘤细胞的强大的细胞毒机制来满足这一需求,并具有极高的特异性。在本研究中,我们开发了携带通用启动子EF1α,并能够驱动绿色荧光蛋白（GFP）或荧光素酶报告基因表达的先进的慢病毒载体（LV）系统。我们选择SK-N-MC细胞系作为本研究的代表细胞系,通过流式细胞术检测肿瘤细胞表面蛋白CD276、Lewis Y、Her2、GD2和PD-L1等的表达情况,上述表面蛋白在肿瘤细胞的表达量分别为78%、100%、97%、25%和0。另外,我们将有原发或局部复发或远处转移的尤文氏肉瘤患者纳入此次研究,并且对尤文氏肉瘤患者肿瘤切片进行CD276、Lewis Y、Her2、GD2、PSMA、PD-L1和CD70等免疫组化染色。我们研发出一种先进的CAR-T治疗方案,CAR 2.0,这是一种可以靶向患者肿瘤的多种抗原的初级和增强型CAR-T细胞输注方案。我们从健康供者体内收集T细胞,并且利用可诱导凋亡的、经安全改造的慢病毒载体系统（LVs）,其信号转导结构域为CD28/4-1-BB or CD27/CD3ζ-i Casp9的CAR（4SCAR）转导T细胞。我们利用上述慢病毒载体构建了稳定表达GFP的SK-N-MC细胞,即SKNMC-GFP细胞,使之与CAR-T细胞共培养,用于检测CAR-T细胞的体外杀伤效果,共培养实验结果显示CD276/Lewis Y-CART细胞对靶细胞有明显杀伤作用,而对照组CD19-CART细胞对SKNMC-GFP细胞无明显杀伤作用。为了增强CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果,我们用MTT法研究了化疗药物或组蛋白去乙酰化酶（HDAC）/蛋白酶体抑制剂对肿瘤细胞的毒性作用,为后期联用药物做好基础工作。为了评价CAR-T对尤文氏肉瘤的体内治疗效果,我们将稳定表达荧光素酶基因的SK-N-MC细胞经皮下注射到雄性NOD-SCID小鼠背部,建立肿瘤动物模型（CDX模型）,通过游标卡尺或体内成像系统对肿瘤进行纵向监测,基于成功建立的肿瘤动物模型,CAR-T体内杀伤测试等扩大化的研究正在进行中。