高糖诱导salusin-β在人视网膜毛细血管内皮细胞中的作用及机制研究

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背景:糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)主要以视网膜血管内皮细胞凋亡和血管炎症为特征,是长期高血糖所致的糖尿病(diabetes mellitus,DM)微血管并发症。Salusin-β是一种新发现的多肽,与高血压、动脉粥样硬化、糖尿病性心肌病和急性肾损伤密切相关。然而,salusin-β在高血糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRECs)炎症和凋亡中的确切作用尚不清楚。目的:本研究旨在探讨salusin-β在高糖诱导下人视网膜毛细血管内皮细胞氧化应激、炎症和凋亡的作用及机制。患者和方法:本研究共纳入60例2型糖尿病患者和20例健康对照者。根据眼底照相及眼底荧光血管造影将糖尿病患者分为无DR组、非增殖性DR组(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)和增殖性DR组(proliferative diabetic retinopathy,PDR)。用酶联免疫吸附实验检测血清salusin-β表达量。人视网膜毛细血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRECs)在正常葡萄糖(normal glucose,NG)、高糖(high glucose,HG)中加或不加人工合成多肽salusin-β的环境中培养。Western blotting和免疫荧光染色检测salusin-β的表达。Western blotting检测促炎症细胞因子单核细胞趋化因子-1(Monocyte chemokine-1,MCP-1)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和血管内皮细胞黏附分子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule,VCAM-1)的表达。用2‘,7’二氯荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)测定活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的产生。流式细胞术测定细胞凋亡率。Western blotting检测p38、JNK、p-p38、p-JNK的表达及裂解的caspase3、bax、bcl2等凋亡相关蛋白。结果:糖尿病患者血清salusin-β的表达量较健康对照组明显升高(p=0.0027),在亚组中非增殖型糖尿病性视网膜病变和增殖型糖尿病性视网膜病变患者salusin-β水平均进一步升高(p<0.01)。HG以时间依赖的方式上调HRECs中salusin-β的表达。Salusin-β上调细胞内ROS,并可能通过激活依赖于ROS的JNK和p38MAPK信号通路来加重HG诱导下HRECs的炎症和凋亡。结论:Salusin-β可能通过ROS依赖的JNK和p38MAPK信号通路促进HG诱导下HRECs的炎症和凋亡,salusin-β可能作为DR的潜在治疗靶点。
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