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目的:该实验采用蔓荆子黄素药液作用于人肺癌H322细胞,探讨蔓荆子黄素抑制人肺癌H322细胞增殖的作用机制,从而为蔓荆子黄素在临床上治疗肺癌提供理论依据。
方法:采用不同浓度的蔓荆子黄素药液做用于人肺癌H322细胞,并设置1640培养基培养人肺癌H322细胞作为空白对照组。
(1)应用MTT法检测细胞抑制率,并绘制曲线图,选取蔓荆子黄素最佳的作用浓度及时间;
(2)通过划痕实验检测蔓荆子黄素对人肺癌H322细胞迁移能力的影响;
(3)用流式细胞仪检测蔓荆子黄素各浓度组对H322细胞周期的影响;
(4)用流式细胞仪检测蔓荆子黄素各浓度组对H322细胞凋亡的影响;
(5)采用Western-Blot法检测相关周期蛋白CDK1的表达;原癌基因c-myc的表达;具有调控细胞周期和细胞凋亡的双重功能Survivin蛋白的表达。
结果:MTT结果表明:蔓荆子黄素药液可以有效抑制人肺癌H322细胞的增值,并且呈药物浓度依赖性;与空表组相比较,浓度为1umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L时蔓荆子黄素药液组48h的抑制率分别是:27.46%、27.46%、44.29%、60.32%,蔓荆子黄素药液与空白组对照组比较有显著差异(p<0.05)。
细胞划痕实验结果表明:蔓荆子黄素药液可以有效抑制人肺癌H322细胞迁移,随着药物浓度的增高,划痕愈合率随之降低,而空白对照组愈合能力最强,蔓荆子黄素与空白组比较具有显著性差异(p<0.05),表明蔓荆子黄素药液能够抑制人肺癌H322细胞迁移;
流式细胞周期结果表明:蔓荆子黄素药液对人肺癌H322细胞在G2/M期发生阻滞,与空白对照组相比较,浓度为1umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L时,G2/M期积累的百分比依次为8.65%、8.96%、10.18%、14.48%,蔓荆子黄素组与空白对照组比较有明显差异(p<0.05)。
流式细胞凋亡结果表明:蔓荆子黄素药液对人肺癌H322细胞具有明显的诱导凋亡作用,空白组、1umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L的蔓荆子黄素药液组48h的凋亡率分别是:5.1%、6.9%、7.2%、10.2%、12.7%,蔓荆子黄素药液与空白对照组比较有明显差异(p<0.05)
Western-Blot结果表明:在蔓荆子黄素药液作用48h后,用Westernblot方法检测H322细胞对c-myc蛋白、CDK1、survivin这三种蛋白表达的影响。结果显示:随着蔓荆子黄素浓度的的升高,细胞中c-myc蛋白、survivin蛋白表达降低;CDK1蛋白表达先上升后下降,提示蔓荆子黄素药液通过下调c-myc、survivin蛋白和先上调后下调CDK1蛋白的表达诱导人肺癌H322细胞凋亡。
结论:蔓荆子黄素药液对人肺癌H322细胞的增值具有明显的抑制作用;蔓荆子黄素药液可以抑制人肺癌H322细胞的迁移;蔓荆子黄素药液作用于人肺癌H322细胞,使得细胞周期阻滞在G2/M期;蔓荆子黄素药液通过下调c-myc、survivin蛋白的表达诱导人肺癌H322细胞凋亡;蔓荆子黄素药液通过下调c-myc、survivin蛋白,先上调后下调CDK1蛋白的表达诱导人肺癌H322细胞凋亡。
方法:采用不同浓度的蔓荆子黄素药液做用于人肺癌H322细胞,并设置1640培养基培养人肺癌H322细胞作为空白对照组。
(1)应用MTT法检测细胞抑制率,并绘制曲线图,选取蔓荆子黄素最佳的作用浓度及时间;
(2)通过划痕实验检测蔓荆子黄素对人肺癌H322细胞迁移能力的影响;
(3)用流式细胞仪检测蔓荆子黄素各浓度组对H322细胞周期的影响;
(4)用流式细胞仪检测蔓荆子黄素各浓度组对H322细胞凋亡的影响;
(5)采用Western-Blot法检测相关周期蛋白CDK1的表达;原癌基因c-myc的表达;具有调控细胞周期和细胞凋亡的双重功能Survivin蛋白的表达。
结果:MTT结果表明:蔓荆子黄素药液可以有效抑制人肺癌H322细胞的增值,并且呈药物浓度依赖性;与空表组相比较,浓度为1umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L时蔓荆子黄素药液组48h的抑制率分别是:27.46%、27.46%、44.29%、60.32%,蔓荆子黄素药液与空白组对照组比较有显著差异(p<0.05)。
细胞划痕实验结果表明:蔓荆子黄素药液可以有效抑制人肺癌H322细胞迁移,随着药物浓度的增高,划痕愈合率随之降低,而空白对照组愈合能力最强,蔓荆子黄素与空白组比较具有显著性差异(p<0.05),表明蔓荆子黄素药液能够抑制人肺癌H322细胞迁移;
流式细胞周期结果表明:蔓荆子黄素药液对人肺癌H322细胞在G2/M期发生阻滞,与空白对照组相比较,浓度为1umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L时,G2/M期积累的百分比依次为8.65%、8.96%、10.18%、14.48%,蔓荆子黄素组与空白对照组比较有明显差异(p<0.05)。
流式细胞凋亡结果表明:蔓荆子黄素药液对人肺癌H322细胞具有明显的诱导凋亡作用,空白组、1umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L的蔓荆子黄素药液组48h的凋亡率分别是:5.1%、6.9%、7.2%、10.2%、12.7%,蔓荆子黄素药液与空白对照组比较有明显差异(p<0.05)
Western-Blot结果表明:在蔓荆子黄素药液作用48h后,用Westernblot方法检测H322细胞对c-myc蛋白、CDK1、survivin这三种蛋白表达的影响。结果显示:随着蔓荆子黄素浓度的的升高,细胞中c-myc蛋白、survivin蛋白表达降低;CDK1蛋白表达先上升后下降,提示蔓荆子黄素药液通过下调c-myc、survivin蛋白和先上调后下调CDK1蛋白的表达诱导人肺癌H322细胞凋亡。
结论:蔓荆子黄素药液对人肺癌H322细胞的增值具有明显的抑制作用;蔓荆子黄素药液可以抑制人肺癌H322细胞的迁移;蔓荆子黄素药液作用于人肺癌H322细胞,使得细胞周期阻滞在G2/M期;蔓荆子黄素药液通过下调c-myc、survivin蛋白的表达诱导人肺癌H322细胞凋亡;蔓荆子黄素药液通过下调c-myc、survivin蛋白,先上调后下调CDK1蛋白的表达诱导人肺癌H322细胞凋亡。