目的：三氧化二砷（As₂O₃）是治疗对维A酸耐药的复发急性早幼粒细胞白血病的有效、安全的药物，完全缓解（CR）率高，其药理主要作用于PML/RARa融合蛋白，是通过诱导分化和促使癌细胞凋亡而达到治疗的目的。但是临床上As₂O₃存在早期诱导分化阶段白细胞数急剧增长，白血病细胞的浸润增加了病人治疗的危险性。有学者认为白血病细胞浸润现象与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）有关，VEGF是调节血管生成的最重要的细胞因子，VEGF和它的受体（Flt-1）结合刺激肿瘤血管内皮细胞形成新生血管，与多种肿瘤的生长、转移、预后有关。基质金属蛋白酶（matrix metal proteinases, MMPs）是一系列蛋白水解酶，在肿瘤侵袭和复发过程中发挥着重要作用，MMP-9通过降解Ⅳ型胶原酶促进细胞外基质重塑并破坏基底膜以促进血管形成，MMP-9能够上调VEGF的表达。Survivin基因是近年发现的一种抑制凋亡新基因，属于凋亡蛋白抑制家族（inhibitor of apoptosis protein, IAP）成员，在肿瘤的发生、发展过程中起到了重要作用。丙戊酸钠（valproic acid, VPA）是临床上广泛应用的广谱抗癫痫药，可阻滞肿瘤细胞的细胞周期并诱导肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤细胞自我吞噬。近年来发现其可通过阻碍血管生成而达到治疗肿瘤的目的。本实验探讨VPA联合不同浓度As₂O₃对t（15,17）APL细胞株NB4细胞血管新生相关因子表达的影响。方法：NB4细胞培养，实验分不同浓度的As₂O₃即0、0.1、0.5、1.0、2.0μmol/L及不同浓度As₂O₃联合VPA共10组，利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒性反应，采用RT-PCR方法检测细胞VEGF/Flt-1、MMP-9及SurvivinmRNA的表达。Western Blot方法检测VEGF及Survivin蛋白的表达。结果：1不同处理组对NB4细胞株存活率的影响MTT结果显示，单用As₂O₃组随着As₂O₃浓度的增加，细胞存活率依次降低,差异具有显著性（P<0.05）；而As₂O₃联合VPA组均较单用As₂O₃组细胞存活率下降，经统计学分析差异具有显著性（P<0.05）;不同浓度As₂O₃联合VPA组间进行统计分析（P>0.05）差异无统计学意义。2不同浓度AS2O3对NB4细胞VEGF基因及蛋白表达的影响2.1经半定量RT-PCR分析，0.1、0.5、1.0μmol/L As₂O₃组与对照组相比VEGF mRNA表达增强，差异有统计学意义（P<0.05）。2.0μmol/LAs₂O₃组与对照组相比VEGF mRNA表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。2.2经Western-Blot检测发现，0.1、0.5、1.0μmol/L As₂O₃组与对照组相比VEGF蛋白表达增强，差异有统计学意义（P<0.05）。2.0μmol/LAs₂O₃组与对照组相比VEGF蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。3不同浓度AS2O3对NB4细胞Flt-1基因表达的影响经半定量RT-PCR分析，0.1、0.5、1.0μmol/L As₂O₃组与对照组相比Flt-1mRNA表达增强，差异有统计学意义（P<0.05）。2.0μmol/L As₂O₃组与对照组相比Flt-1mRNA表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。4不同浓度As₂O₃对NB4细胞MMP-9基因表达的影响经半定量RT-PCR分析，0.1、0.5、1.0μmol/L As₂O₃组与对照组相比MMP-9mRNA表达增强，差异有统计学意义（P<0.05）。2.0μmol/L As₂O₃组与对照组相比MMP-9mRNA表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。5VPA联合As₂O₃与单用As₂O₃对NB4细胞VEGF基因及蛋白表达的影响5.1经半定量RT-PCR分析，VPA联合不同浓度As₂O₃组与单用As₂O₃组比较VEGF mRNA表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。5.2经Western-Blot检测发现，VPA联合不同浓度As₂O₃组与单用As₂O₃组比较VEGF蛋白表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。6VPA联合As₂O₃与单用As₂O₃对NB4细胞Flt-1基因表达的影响经半定量RT-PCR分析，VPA联合不同浓度As₂O₃组与单用As₂O₃组比较Flt-1mRNA表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。7VPA联合As₂O₃与单用As₂O₃对NB4细胞MMP-9基因表达的影响经半定量RT-PCR分析，VPA联合不同浓度As₂O₃组与单用As₂O₃组比较MMP-9mRNA表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。8不同浓度As₂O₃对NB4细胞Survivin基因及蛋白表达的影响8.1经半定量RT-PCR分析，不同浓度As₂O₃组与对照组相比SurvivinmRNA表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。8.2经Western-Blot检测发现，不同浓度As₂O₃组与对照组相比Survivin蛋白表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。9VPA联合As₂O₃与单用As₂O₃对NB4细胞Survivin基因及蛋白表达的影响9.1经半定量RT-PCR分析，VPA联合不同浓度As₂O₃组与单用As₂O₃组比较Survivin mRNA表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。9.2经Western-Blot检测发现，VPA联合不同浓度As₂O₃组与单用As₂O₃组比较Survivin蛋白表达均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1. VPA增加As₂O₃诱导NB4细胞株存活率下降2.小剂量As₂O₃诱导血管新生相关因子VEGF/Flt-1及MMP-9表达增加3. VPA联合As₂O₃组与单用As₂O₃组相比VEGF/Flt-1及MMP-9表达均降低4.小剂量As₂O₃抑制Survivin mRNA及蛋白的表达，VPA联合As₂O₃组与单用As₂O₃组相比Survivin表达降低