三种体细胞来源的诱导多能干细胞在转录组水平上的比较研究

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目的:体细胞重编程为诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cell,iPSC)有多种体细胞来源,但不同体细胞来源iPSC在分子水平,转录调控水平有何差异仍不清楚。在此基础上本文首次建立了同一人不同体细胞来源诱导多能干细胞系,比较不同体细胞来源的iPSC在转录组水平上的差异,为后期iPSC在细胞治疗以及临床应用方面提供理论依据。方法:分别收集三个人的三种不同体细胞,分离纯化后将带有重编程因子质粒分别电转入尿液细胞、皮肤成纤维细胞及血细胞,重编程诱导培养基培养,待克隆长大挑取、纯化培养以及扩增,并鉴定其有效性与多能性,从而建立不同体细胞来源的iPSC细胞系。基于Illumina技术测序平台,利用双末端测序方法对细胞进行转录组测序分析,通过生物信息学及统计学方法分析细胞差异性基因表达,生物学功能,比较不同体细胞来源重编程过程中的分子调控机制,解析不同细胞重编程的分子机理,进而为揭示重编程的分子机制提供理论依据。结果:不同来源体细胞在电转染10-15天后观察到有类似胚胎干细胞形态的克隆形成,纯化扩增后细胞显示正常染色体核型、表达多能性标记物及多能性基因,畸胎瘤实验证明细胞具有体内分化为三胚层能力,从而建立了不同体细胞来源的人诱导多能干细胞系。转录组分析发现三种不同体细胞来源诱导的iPSC无显著性差异,原代细胞尿液细胞与皮肤成纤维细胞无显著性差异,而血细胞与皮肤成纤维细胞、尿液细胞具有明显差异。发现血细胞重编程与尿液细胞及皮肤成纤维细胞不同,进一步发现血细胞重编程中细胞粘附性明显上调。结论:通过非整合质粒转染成功将不同组织来源体细胞重编程为诱导多能干细胞,建立了同一个体不同体细胞来源的诱导多能干细胞系。证明了遗传背景对iPS细胞的产生无影响。在遗传背景相同情况下,血细胞重编程与尿液细胞及皮肤细胞重编程有明显差异,其中发现血细胞重编程后其粘附性明显上调。这就为后期细胞治疗,药物筛选及组织工程等临床应用使用何种细胞来源的人iPSC细胞提供更好的理论支持,从而加快干细胞的临床应用。
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