背景1,25（OH）₂VitD₃是人体内正常的生理活性物质,近年来关于1,25（OH）₂VitD₃对肿瘤细胞的作用机制取得了一些进展,包括抑制细胞增殖、减少肿瘤细胞DNA和RNA的合成、调节免疫、减少肿瘤血管生成和诱导细胞凋亡等,但其确切的分子机制至今仍未阐明。目的探讨1,25（OH）₂VitD₃是否抑制视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞增殖和诱导其凋亡,揭示1,25（OH）₂VitD₃对视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞的作用是否与bax/bcl-2基因的表达有关。方法1、分组:用不同浓度的1,25（OH）₂VitD₃处理视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞48小时,按药物浓度的不同分为4组:高浓度组,1×10^-7M 1,25（OH）₂VitD₃;中浓度组,1×10^-8M 1,25（OH）₂VitD₃;低浓度组,1×10^-9M 1,25（OH）₂VitD₃;对照组,仅加无水乙醇[1,25（OH）₂VitD₃的溶剂]。2、检测:采用MTT实验,分光光度计测OD值;台盼蓝染色实验,通过计数板计算活细胞率;采用流式细胞仪（Annexin V-FITC/PI标记法）检测凋亡细胞比率;采用半定量RT-PCR方法检测bax/bcl-2基因mRNA的表达。结果形态学观察:与对照组相比1,25（OH）₂VitD₃处理组的视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞体积逐渐缩小,细胞膜皱折,细胞聚合能力下降,细胞碎片增多;MTT实验:1,25（OH）₂VitD₃处理组的视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞的OD值明显下降,高浓度组0.579±0.084,中浓度组0.940±0.098,低浓度组1.142±0.097,对照组1.750±0.162（p＜0.01 vs control）;台盼蓝实验:1,25（OH）₂VitD₃处理组的视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞数量明显下降,高浓度组0.83±0.12,中浓度组1.28±0.15,低浓度组1.53±0.17,对照组1.96±0.14（p＜0.01 vs control）;流式细胞仪测细胞凋亡实验:1,25（OH）₂VitD₃处理组的视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞凋亡数量明显升高,凋亡细胞百分比分别为,高浓度组15.033±1.537%,中浓度组12.866±0.907%,低浓度组10.600±1.082%,对照组2.233±0.839%（p＜0.01 vs control）;半定量RT-PCR方法检测bax/bcl-2基因mRNA的表达:1,25（OH）₂VitD₃处理组的视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞的bax基因的表达增高,bcl-2基因表达减低,bax/bcl-2的比值增高,bax基因半定量RT-PCR扩增后mRNA相对灰度分别为,高浓度组0.699±0.073,中浓度组0.539±0.062,低浓度组0.472±0.053,对照组0.396±0.034;bcl-2基因半定量RT-PCR扩增后mRNA相对灰度分别为,高浓度组0.458±0.049,中浓度组0.572±0.066,低浓度组0.679±0.044,对照组0.789±0.079;bax/bcl-2基因半定量RT-PCR扩增后mRNA表达相对灰度分别为,高浓度组1.508±0.174,中浓度组0.944±0.069,低浓度组0.695±0.040,对照组0.504±0.053（p＜0.05 vs control）。结论1,25（OH）₂VitD₃能有效抑制体外培养的HXO-RB₄₄细胞的生长和增殖;通过流式细胞仪（Annexin V-FITC/PI标记法）检测凋亡细胞比率,证实1,25（OH）₂VitD₃有明确的诱导HXO-RB₄₄肿瘤细胞凋亡作用;初步证实1,25（OH）₂VitD₃一定程度上调HXO-RB₄₄细胞bax基因mRNA的表达和下调bcl-2基因的mRNA表达,可能通过该机制诱导HXO-RB₄₄细胞的凋亡。