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甘油二酯（Diacylglycerol，DAG）是一类甘油三酯（Triacylglycerol，TAG）中一个脂肪酸被羟基取代的结构脂质，是由甘油和两个脂肪酸酯化后得到的，是天然植物油脂中的微量成分，是油脂在人体内消化的中间产物，是公认安全（GRAs）的食品成分，同时也是一种多功能添加剂，在食品、医药、化工等行业有着广阔的应用前景。甘油二酯可以分为1,3-甘油二酯（1,3-DAG）和1,2(2,3)-甘油二酯（1,2(2,3)-DAG）这两种同分异构体，其中1,3-甘油二酯与普通油脂在人体内的代谢途径不一样，食用1,3-甘油二酯后在体内不会蓄积，具有减少内脏脂肪、降低血脂、缓解糖尿病、抑制体重等作用。由于天然产物中的甘油二酯含量较少，因此合成高纯度1,3-甘油二酯的技术日益受到国内外广泛关注。本论文主要研究了在无溶剂体系中酶促酯化合成1,3-甘油二酯的方法，并对合成产物采用分子蒸馏法和硅胶柱色谱法相结合的方法进行分离纯化，得到高纯度1,3-甘油二酯。首先研究在无溶剂体系中利用固定化脂肪酶催化甘油与油酸进行酯化反应合成1,3-二油酸甘油酯。进行脂肪酶的筛选，从固定化脂肪酶Lipozyme RM IM、Lipozyme TL IM、Novozymes435中筛选出Lipozyme RM IM作为最佳催化剂。比较分子筛和真空这两种不同的脱水方式对1,3-二油酸甘油酯的影响，确定选择真空脱水的方式进行酯化反应合成1,3-二油酸甘油酯。实验进一步考察了影响酯化反应的几个主要因素：底物摩尔比、加酶量、反应温度对酯化反应过程中油酸转化率和1,3-二油酸甘油酯含量的影响。通过响应面进行优化，建立的最优工艺条件为：底物摩尔比（脂肪酸:甘油）为2.1:1，酶添加量6.90%（底物总质量计），反应温度63oC，反应时间1.9h，该工艺条件下1,3-二油酸甘油酯的含量达到61.20%。然后，通过控制预热温度、进料速率、蒸馏温度和刮板速率，对酯化混合物进行二级分子蒸馏，得到使重相得率高和酸价低的分子蒸馏纯化1,3-二油酸甘油酯的工艺条件，分子蒸馏条件为：预热温度40oC，进料速率2mL/min，刮板速率100r/min，一级蒸馏温度180oC，二级蒸馏温度200oC，真空压力1.0×10-2mbar。经过两级分子蒸馏后，1,3-二油酸甘油酯的纯度从61.20%提高到76.41%，回收率为69.02%。最后，通过采用硅胶柱色谱法进一步纯化1,3-二油酸甘油酯。通过薄层层析硅胶板从A、B、C、D（A和B是不同配比的正己烷-乙醚-乙酸的混合液，C和D是正己烷-乙酸乙酯-乙醚-乙酸的混合液）四种洗脱剂中筛选出D为硅胶柱色谱洗脱剂后，进一步考察了洗脱流速、上样浓度、硅胶添加量对分离效果的影响，以1,3-二油酸甘油酯的回收率和纯度为指标，确定了最佳硅胶柱色谱分离条件：洗脱流速1.5mL/min，上样浓度75mg/mL，硅胶添加量30g。所得到的1,3-二油酸甘油酯样品纯度可达98.03%，回收率为69.90%。